02910naa a2200229 a 450000100080000000500110000800800410001910000180006024501310007826000090020930000090021852020840022765000210231165300170233270000220234970000150237170000180238670000180240470000150242270000180243777302250245518759342011-02-07       2010    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aBEZERRA N. L.  aAvaliação de antígenos recombinantes de Brucella abortus em teste sorológico para brucelose bovina.h[electronic resource]  c2010  a1 p.  aBrucella abortus é uma bactéria intracelular facultativa, causadora da brucelose, enfermidade infecciosa de grande impacto econômico por causar distúrbios reprodutivos nos animais, além de ser uma zoonose. Está caracterizado em bactérias intracelulares o sistema de secreção tipo IV (VirB), responsável pelo transporte de moléculas efetoras e relacionado com fatores de virulência de Brucella spp., e também o gene gap, presente no genoma de B. abortus, que tem especificidade para o complexo Brucella. Dessa forma estas proteínas tem potencial como antígeno para diagnóstico da brucelose bovina. Objetiva-se com este estudo, analisar as proteínas recombinantes VirB9, VirB12 e GAPDH, como potenciais antígenos para diagnóstico da brucelose bovina. Para isto, as proteínas recombinantes foram produzidas via sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli após cultivo de uma colônia transformada em caldo LB kanamicina/cloranfenicol, com os genes virB9, virB12 e gap e adicionado 1 mM de IPTG. A produção foi avaliada por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida a 15 %, seguido de coloração com azul de Coomassie. A antigenicidade das proteínas foi avaliada pela técnica de Western blot, frente a soros de bovinos positivos para a brucelose. Posteriormente estas proteínas serão testadas frente aos parâmetros de qualidade em ensaios de ELISA. Até o momento, todos os genes foram amplificados e clonados nos plamídeos pET47(b) (genes virB9 e virB12) e pET28(a) (gene gap). Após a expressão dos genes, as proteínas recombinantes apresentaram uma massa molecular de 30 kDa (VIRB9), 19 kDa (VIRB12) e 36 kDa (GAPDH). Todas as três proteínas mostraram-se antigênicas frente aos soros de bovinos naturalmente infectados com Brucella spp. Ao término do projeto, espera-se a padronização de um teste de ELISA para B. abortus, contribuindo para o aumento da precisão do diagnóstico da brucelose bovina, por meio de testes com maior especificidade e sensibilidade, empregando antígenos recombinantes específicos do complexo Brucella.  aBrucella Abortus  aBrucella spp1 aROSINHA, G. M. S.1 aELISEI, C.1 aSANTOS, L. R.1 aARAUJO, F. R.1 aBASTOS, R.1 aSOARES, C. O.  tIn: JORNADA CIENTÍFICA DA EMBRAPA GADO DE CORTE, 6., 2010, Campo Grande, MS. Ética na pesquisa científica: [Anais da ...]. Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2010. 1 CD-ROM. Coordenadora: Vanessa Felipe de Souza