02032naa a2200301 a 450000100080000000500110000800800410001902400410006010000170010124501520011826000090027050000190027952011610029865000220145965000080148165000110148965000160150065300220151665300150153865300190155365300100157265300140158270000220159670000140161870000160163270000150164877300670166318723622019-04-12       2010    bl uuuu     u00u1 u    #d7 a10.1590/S0103-847820100011000222DOI1 aBASSO, M. F.  aProdução de antissoro policlonal utilizando a proteína capsidial recombinante do Rupestris stem pitting-associated virus.h[electronic resource]  c2010  aNota técnica.  aO Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) é o agente causal das caneluras do lenho da videira. Este trabalho teve como objetivo produzir antissoro policlonal a partir da proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV e avaliar a sua especificidade e sensibilidade. O gene da CP do RSPaV, com 780pb, foi previamente caracterizado. Esse gene foi subclonado no sítio de restrição EcoRI, no vetor de expressão pRSET-B e o plasmídeo recombinante foi utilizado para induzir a expressão da CP em Escherichia coli. A CP, ligada a uma cauda de seis histidinas, foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA a partir do extrato de proteínas totais extraídas de E. coli. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot, utilizando-se anticorpos comerciais contra a cauda de seis histidinas. A CP recombinante expressada in vitro apresentou massa molecular de cerca de 31kDa. A proteína purificada foi quantificada e 2,55mg foram utilizados para a imunização de um coelho. O antissoro policlonal obtido reagiu com diferentes isolados deste vírus, extraídos de videiras em ELISA indireto.  aDoença de planta  aUva  aVírus  aViticultura  aCanelura do lenho  aDetecção  aLimpeza clonal  aRSPaV  aSorologia1 aFAJARDO, T. V. M.1 aEIRAS, M.1 aAYUB, R. A.1 aNICKEL, O.  tCiência Rural, Santa Mariagv. 40, n. 11, p. 2385-2388, 2010.