04070nam a2200217 a 450000100080000000500110000800800410001910000150006024501520007526000160022730000100024350001100025352033540036365000190371765000130373665000220374965000350377165000240380665000090383065300130383918672892011-04-18       2010    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aENGELS, C.  aObtenção e caracterização de plantas de soja (Glycine max L. Merril) geneticamente modificadas com o gene AtDREB2A visando tolerância à seca.  a2010.c2010  a93 f.  aDissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Londrina, Londrina.  aAs plantas estão expostas a diferentes condições ambientais e, entre estas, a seca é um fator abiótico causador de reduções de até 50% da produtividade. Nos estados do Sul do Brasil, a estiagem ocorrida na safra brasileira de 2004/2005, provocou perdas de U$ 2,32 bilhões. Para tentar diminuir os prejuízos, a biotecnologia vem utilizando diversas técnicas, como a transformação genética vegetal para a inserção de genes de interesse visando à obtenção de uma cultivar mais tolerante ao déficit hídrico. A família gênica DREB, genes ABA independentes, são classificados como genes responsivos a estresses abióticos, inclusive à seca. O gene DREB2A transcreve um fator de transcrição que regula uma cascata de genes responsivos à seca, ao calor, à salinidade e ao H202, e já foi caracterizado em diversas culturas como soja, milho, arroz e girassol. No presente estudo o gene AtDREB2A, isolado de A. thaliana, foi inserido em soja (G/ycine max L. Merril) via biobalística, por co-transformação com o gene AHAS, gene de seleção que confere resistência ao herbicida imazapir. As plantas geradas foram caracterizadas quanto ao número de cópias inseridas, estabilidade do transgene e nível de expressão gênica, via PCR quantitativo, em condições de déficit hídrico. Os tratamentos de deficiência hídrica foram aplicados em dois experimentos: um de desidratação celular, em condições controladas de temperatura e umidade e outro de hidroponia, esgotando-se a solução nutritiva de caixas plásticas e expondo as raízes das plantas ao ambiente. Como resultado, setenta e oito plantas positivas e vivas foram obtidas, com uma eficiência de transformação de 1,19%. Os eventos P 1397 e P 2193 apresentaram aproximadamente de 9 a 17 e 72 a um elevado número de cópias na geração To, e de 1 a 3 e 2 a 5 cópias na geração Tl, sendo que o evento P 2193 segregou de maneira independente na geração T1. Quanto à quantificação relativa da expressão gênica, o evento P 1397 apresentou resultados significativos no experimento de desidratação celular nos tratamentos aplicados de T30 min (142,105 p&gt0,001) e T90 min (36,96 p&gt0,038) quando comparados com o TO mino No experimento de hidroponia, a geração T2 do evento P 2193, indicou que, quando os tratamentos foram comparados com o tempo TO min do próprio evento, apenas o T60 min (30,30 p&gt0,003) das raízes apresentou expressão do gene mais significativa. Estes resultados sugerem que os eventos positivos estão superexpressando o transgene AtDREB2A, em condições de estresse por déficit hídrico. Ainda foi possível observar uma expressão diferencial entre os tecidos avaliados, uma vez que, as raízes expressam mais o transgene quando comparadas com as folhas, ambos tecidos submetidos a déficit hídrico por hidroponia tanto quando foi utilizada a cultivar não transgênica BR16 como calibradora quanto o tempo T0 min do evento testado. Os resultados obtidos de quantificação e número de cópias sugerem que o transgene foi inserido com sucesso em local de expressão no genoma e que não houve silenciamento. No entanto, novos estudos devem ser realizados visando à obtenção de maiores informações quanto a um possível aumento da tolerância a condições de estresse hídrico, nas plantas de soja GMs obtidas.  aPlant breeding  aSoybeans  aTransgenic plants  aMelhoramento genético vegetal  aPlanta transgênica  aSoja  aAtDREB2A