01876naa a2200229 a 450000100080000000500110000800800410001910000180006024500700007826000090014852011830015765000230134065000120136365000230137565300340139865300230143265300390145570000270149470000220152170000230154377300800156610830862012-06-26       2006    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aMARCHI, C. E.  aIsolamento e regeneração de protoplastos de Magnaporthe grisea.  c2006  aProtoplastos são ferramentas biológicas importantes para pesquisas em fungos filamentosos, sendo empregados intensamente em transformação genética. O isolamento de protoplastos de Magnaporthe grisea foi facilitado com Novozym 234, contudo, este complexo enzimático encontra-se indisponível no mercado. Assim, objetivou-se comparar a eficiência de enzimas líticas disponíveis comercialmente na obtenção de protoplastos de M. grisea. Paralelamente, analisaram-se estabilizadores osmóticos, tempos de digestão e freqüência de regeneração. Maior produção de protoplastos foi obtida com o uso simultâneo de Lysing Enzymes e Cellulase Onozuka R-10. O uso de 10 ou 15 mg de cada complexo enzimático, em 3 mL de estabilizador osmótico, resultou em maior liberação de protoplastos. O melhor estabilizador osmótico foi MgSO4 1,2 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8, seguido por MgSO4 0,8 M / NaH2PO4 0,01 M, pH 5,8. O isolamento de protoplastos foi monitorado a cada 60 minutos, atingindo o máximo após incubação por 3 a 6 horas. No entanto, maior freqüência de regeneração (19,4%) foi registrada para protoplastos obtidos após 3 horas de hidrólise enzimática.  aMagnaporthe grisea  aBrusone  aPyricularia Grisea  aPatógeno da cultura do arroz  aProtoplastização  aProtoplastos de Magnaporthe grisea1 aBROMMONSCHENKEL, S. H.1 aQUEIROZ, M. V. de1 aMIZUBUTI, E. S. G.  tSumma Phytopathologica, Botucatugv. 32, n. 3, p. 232-238, July/Sept. 2006.