03259naa a2200277 a 450000100080000000500110000800800410001910000220006024501580008226000090024052024080024965000420265765000140269965000220271365000080273565000110274365000160275465300360277065300270280665300140283370000180284770000150286570000130288070000160289377300720290915427522019-08-08       2007    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aFAJARDO, T. V. M.  aExpression of grapevine leafroll-associated virus 3 coat protein gene in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies.h[electronic resource]  c2007  aGrapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), the main viral species ofthe grapevine leafroll complex, causes yield and quality reduction in grapes (Vitis spp.). The coat protein gene was RT-PCR-amplified from total RNA extracted from infected grapevine leaves and the amplified fragment was cloned and completely sequenced. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-C expression vector. The recombinant plasmid was used to transform Escherichia coli BL21 :DE3 and express the capsid protein. The coat protein, fused to a 6 His-tag, was purified by affinity chromatography using an Ni-NTA resin. The identity ofthe purified protein was confirmed by SDS-PAGE and Westem blot. The in vitro-expressed protein was quantified and used for rabbit immunizations. The antiserum was shown to be sensitive and specific for the detection ofGLRaV-3 in grapevine extracts in Westem blot and DAS-ELISA assays, with no unspecific or heterologous reactions against other non-serologically related viruses being observed. Additional keywords: grapevine, GLRaV-3, recombinant protein, serology, antibodies. Expressão da proteína capsidial do Grapevine leafroll-associated virus 3 em Escherichia coli e produção de anticorpos policlonais Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), a principal espécie viral do complexo do enrolamento da folha da videira tViüs spp.), causa reduções no rendimento e na qualidade da uva. O gene da proteína capsidial foi amplificado via RTPCR a partir de RNA total, extraído de folhas de videira infectadas. O fragmento amplificado foi clonado e completamente seqüenciado. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-C. O plasmídeo recombinante foi utilizado para a expressão da proteina capsidial em Escherichia co/i BL21:DE3. A proteína capsidial, ligada a uma cauda de 6-His, foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDSPAGE e Wesfern blot e, após quantificação, foi utilizada para imunizar coelhos. O anti-soro mostrou-se sensível e específico para a detecção do GLRaV-3 em extratos de videira por Wesfern blot e DAS-ELISA, não tendo sido observadas reações inespecíficas ou heterólogas contra outros vírus sorologicamente não relacionados. Palavras-chave adicionais: videira, GLRaV-3, proteína recombinante, sorologia, anticorpos.  aGrapevine leafroll-associated virus 3  aAnticorpo  aDoença de Planta  aUva  aVírus  aViticultura  aEnrolamento da folha da videira  aProteína recombinante  aSorologia1 aBARROS, D. R.1 aNICKEL, O.1 aKUHN, G.1 aZERBINI, M.  tFitopatologia Brasileira, Brasíliagv. 32, n. 6, p. 496-500, 2007.