03469nam a2200193 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501140007926000160019330000110020950001270022052028420034765000180318965000180320765000100322565300100323565300300324514908962023-10-17       2007    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aBRANDAO, R. L.  aTransformação genética de Sorghum bicolor (L.) Moench) visando tolerância ao Al+3.h[electronic resource]  a2007.c2007  a116 p.  aTese (Doutorado em Fisiologia Vegetal) - Universidade Federal de Lavras, Lavras.  Coorientadora: Andréa Almeida Carneiro.  aA transformação genética tem sido freqüentemente associada a programas de melhoramento genético. Esta técnica permite a introdução de gene(s) exógeno(s) no genoma das plantas, modificando características específicas. Pode ser uma importante ferramenta de auxílio aos programas de melhoramento convencional de sorgo. Entretanto, a maioria dos protocolos de transformação genética requer o estabelecimento prévio de sistemas de regeneração de plantas in vitro. Portanto, com a finalidade de produzir plantas transgênicas de sorgo com um aumento de tolerância ao alumínio tóxico presente em solos ácidos, os objetivos deste trabalho foram (i) selecionar cultivares de sorgo capazes de regenerarem, eficientemente, em cultivo in vitro via organogênese ou embriogênese; (ii) otimizar parâmetros para transformação via biobalística de inflorescências imaturas de sorgo e (iii) produzir plantas transgênicas de sorgo expressando o transportador de malato, ALMT1, isolado de trigo. Inicialmente, identificou-se três genótipos de sorgo, dentre 15 testados, capazes de eficientemente regenerar in vitro via organogênese em meio MS basal suplementado com CuS04.5H20, 2,4-D, e BAP. Também, foi estabelecido que mais de 6 semanas de cultivo neste meio prejudica a regeneração das plantas. Regeneração de sorgo via embriogênese foi testada usando duas formulações de meio de cultivo, MS (meio CIM) e N6(meio N6) meio basal suplementado com 2,4-D. Fragmentos de inflorescência imatura de 9 cultivares de sorgo elite desenvolveram calos embriogênicos (CE) em meio CIM, e duas cultivares foram selecionadas por sua mais alta produção de CE. A cultivar CMSXS 102B foi usada para a otimização dos parâmetros de bombardeamento de micropartículas através da análise da expressão transiente da antocianina. Os parâmetros testados incluem pressão de aceleração, distancia de vôo da micropartícula e o tempo de permanência dos explantes em meio osmótico antes do bombardeamento. O mais alto número de células expressando o gene da antocianina foi obtido quando calos embriogênicos foram cultivados em meio osmótico durante 4 horas antes do bombardeamento, posicionados 3 cm de distância da plataforma do microcarreador e bombardeados com uma pressão de aceleração do gás hélio de 1000 psi. A utilização destes paramentos permitiu obter plantas transgênicas de sorgo, expressando os genes GUS e bar, com uma eficiência de transformação variando de 1,01 % a 3,33%. Finalmente, os parâmetros biobalísticos estabelecidos foram utilizados para gerar plantas transgênicas de sorgo expressando o gene ALMT1. Plantas T1 mostraram um aumento no nível de tolerância ao Al +3 quando crescidas em cultura hidropônica sobre estresse de alumínio, comparadas com o controle não transgênico.  aEmbriogénese  aOrganogénese  aSorgo  aALMT1  aTransformação genética