03605nam a2200265 a 450000100080000000500110000800800410001910000210006024501150008126001170019630000110031352027800032465300120310465300220311665300110313865300250314970000160317470000200319070000220321070000180323270000260325070000200327670000170329670000260331310481052011-08-10       2007    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aIBELLI, A. M. G.  aSeleção de genes constitutivos para estudos de expressão gênica em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos  aIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 53., 2007, Águas de Lindóia, SP. Anais... Águas de Lindóia: SBGc2007  ap. 151  aA quantificação de RNA mensageiro é amplamente utilizada em estudos de expressão gênica. O método de reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em tempo real é um dos mais sensíveis e eficientes para examinar os padrões de expressão. Para que se tenha uma análise confiável, a escolha de genes constitutivos estáveis é essencial. Estes genes devem apresentar expressão constante, independentemente do tecido ou tratamento utilizado. Isto permite a normalização de diferenças existentes na quantidade inicial de RNA, em possíveis variações experimentais e na síntese de cDNA. Diversos genes como GAPDH, RNA ribossômico 18S e actinas são empregados, porém variações já foram observadas, sugerindo que nenhum gene possa ser considerado estável para todas as condições experimentais. O objetivo deste trabalho foi selecionar um gene constitutivo estável em abomaso e linfonodo abomasal de bovinos. Dez bezerros da raça Nelore foram mantidos livres de infecções por parasitos desde o nascimento. Esses animais foram separados em dois grupos: 5 animais submetidos a infecção artificial com larvas de Haemonchus spp (grupo tratamento) e 5 animais livres de infecção (grupo controle). A coleta de amostras de tecidos e linfonodos abomasais foi feita sete dias após a infecção. O isolamento do RNA total foi feito com reagente Trizol (Invitrogen) e síntese de cDNA por transcrição reversa. A quantificação dos genes RPL-19, GAPDH e HPRT-1 foi avaliada pela técnica de RT-PCR em tempo real utilizando SYBR Green como corante. As análises referentes às quantificações foram realizadas com os valores de Ct obtidos para cada gene. A fim de verificar possíveis variações entre os genes, foram utilizados os programas Analyse-it (Excel), o teste não paramétrico Randomisation test e o programa de normalização Genorm. Os resultados mostraram que para linfonodo abomasal os genes RPL-19 e GAPDH não apresentaram expressão diferencial entre os tratamentos (p&gt0,05), enquanto que HPRT-1 foi diferencialmente expresso (p&lt0,05) no teste não paramétrico Randomisation test. Entre os genes RPL-19 e GAPDH os valores de desvio e erro padrão foram 1,23, 0,39 e 2,24 e 0,71, respectivamente. Para abomaso, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais para nenhum dos três genes analisados e o gene RPL-19 apresentou o menor desvio e erro padrão (2,34 e 0,74, respectivamente). A análise realizada pelo programa Genorm mostrou que para ambos os tecidos, o gene RPL-19 foi o mais estável entre os três. Desta maneira, o gene RPL-19 foi o que mostrou maior estabilidade entre os genes analisados, podendo ser empregado em estudos de expressão gênica com tecidos e linfonodos abomasais de bovinos.  aBovinos  aGene constitutivo  aRPL-19  aRT-PCR em tempo real1 aANDRÉO, R.1 aCOUTINHO, L. L.1 aGOUVEIA, J. J. S.1 aNAKATA, L. C.1 aOLIVEIRA, M. C. de S.1 aSOUZA, J. R. T.1 aZAROS, L. G.1 aREGITANO, L. C. de A.