04355naa a2200265 a 450000100080000000500110000800800410001910000250006024501990008526000090028430000110029352032470030465000110355165000220356265000120358465000290359665000090362565300090363465300110364365300110365465300120366570000200367770000160369777303760371314620002007-06-29       1998    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aCHUEIRE, L. M. de O.  aIdentificacao das estirpes de Bradyrhizobium e Rhizobium utilizadas em inoculantes comerciais para as culturas da soja e do feijoeiro pela tecnica de PCR com "Primers" aleatorios ou especificos.  c1998  ap.395.  aNos estudos que procuram avaliar a qualidade dos inoculantes, os beneficios da inoculacao e a ecologia das bacterias fixadoras de N2 entre outros, e importante identificar corretamente as estirpes Rhizobium e Bradyrhizobium. No caso da cultura da soja, duas estirpes, a SEMIA 566 e a SEMIA 586 (=CB 1809), estao estabelecidas em diversos solos brasileiros. Desde 1992, duas variantes dessas estirpes, respectivamente a SEMIA 5079 (=CPAC 15)  e a SEMIA 5080 (=CPAC 7), passaram a ser utilizadas em inoculantes comerciais. Contudo, nao e possivel diferenciar as estirpes variantes de suas respectivas parentais pela analise de aglutinacao com anticorpos de celulas totais o de lipopolissacarideos da parede celular. Recentemente, a identificacao precisa de diversos microrganismos foi possibilitada pela tecnica de PCR (polymerase chain reaction), ou por outra variacao dessa tecnica, o RAPD (random amplified polymorphic DNA), que utiliza "primers" curtos e com sequencias arbitrarias. Finalmente, o PCR com alguns "primers" especificos, como as sequencias REP (repetitive extragenic palindromic) e ERIC (enterobacterial repetitive intergeneric consensus), tambem tem possibilitado a identificacao confiavel de diversas especies de bacterias. Neste estudo, as quatro estirpes citadas anteriormente e as duas outras recomendadas para a utilizacao em inoculantes comerciais para a soja, a SEMIA 587 e a SEMIA 5019 (=29W), apresentaram perfis distintos quando o DNA foi amplificado pela tecnica de RAPD com 21 dos 35 "primers" curtos e aleatorios testados. As quatro estirpes comerciais tambem apresentaram perfis distintos pelo uso da tecnica de PCR com os "primers" especificos REP [REPlR3'CGGICTACIGCIGCIIII5'] e REP2-I ('5 CGICTTATCIGGCCTAC3')]  e ERIC [ERIClR(3'CACTTAGGGGTCCTCGAATGTA5') e ERIC2(5'AAGTAAGTGACTGGGTGA GCG-3'). A vantagem da utilizacao dos "primers" especificos ERIC e REP reside no alto grau de polimorfismo conseguido em uma unica analise. Contudo, esses "primers" especificos produziram perfis identicos para os pares de estirpes SEMIA 566 X SEMIA 5079 e SEMIA 586 X SEMIA 5080. Consequentemente, no caso de estudos envolvendo solos com populacao estabelecida de Bradyrhizobium, a identificacao das estirpes comerciais so e possivel pelo uso do RAPD. Dos 21 "primers" analisados, os mais adequados para a identificacao das estirpes comerciais foram os 62 (5'GGGTAACGCC3'), 134 (5'ACATGCCGTG3')  e 136 (5'GGAAGTCGC C3'), fornecidos pelo Dr. S. Astolfi Filho, e os OPS-01 (5'CTACTGCGCT3') e OPS-11 (5'AGTCGGGTGG3'), da OPERON Technologies, EUA. Em relacao a cultura do feijoeiro, tanto a tecnica de RAPD como a do PCR com os "primers" ERIC e REP produziram perfis distintos para as duas estirpes que hoje sao recomendadas comercialmente, a SEMIA 4077 (=CIAT 899) e a PRF 81. As amplificacoes tambem foram possiveis, com todas as estirpes deste estudo, pela utilizacao de colonias puras, sem necessidade de extracao do DNA. Como ambas tecnicas, RAPD E PCR com "primers" especificos sao de baixo custo, facilmente automatizadas e produzem perfis comprovadamente repetitivos, surgem novas perspectivas para o controle de qualidade dos inoculantes e para os estudos de ecologia de Rhizobium e Bradyrhizobium em solos brasileiros.  aBrazil  anitrogen fixation  aFeijão  aFixação de Nitrogênio  aSoja  aBean  aBrasil  aParana  aSoybean1 aNISHI, C. Y. M.1 aHUNGRIA, M.  tIn: REUNIAO BRASILEIRA DE FERTILIDADE DO SOLO E NUTRICAO DE PLANTAS, 23.; REUNIAO BRASILEIRA SOBRE MICORRIZAS, 7.; SIMPOSIO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA DO SOLO, 5.; REUNIAO BRASILEIRA DE BIOLOGIA DO SOLO, 2., 1998, Caxambu. FertBio 98: interrelacao fertilidade, biologia do solo e nutricao de plantas: consolidando um paradigma - resumos. Lavras: UFLA / SBCS / SBM, 1998.