04358nam a2200193 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501390007926000160021850003000023452035430053465000110407765000130408865300080410165300200410965300270412965300080415611909642023-12-20       2008    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aLEME, L. de O.  aEfeito da fonte protéica durante o cultivo na qualidade e quantidade de embriões bovinos produzidos in vitro.h[electronic resource]  a2008.c2008  aDissertação (Mestrado em Ciências Agrárias) - Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF. Orientador: Rodolfo Rumpf, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, co-orientadora: Margot Alves Nunes Dode, Embrapa Recursos Genéticos Biotecnologia.  aO sucesso da PIV está relacionado ao conhecimento das necessidades dos gametas e embriões em diferentes fases do desenvolvimento. É conhecido que embriões PIV são diferentes dos embriões in vivo em vários aspectos. As diferenças entre os dois modelos têm sido pesquisadas na tentativa de tornar os meios artificiais o mais próximo possível ao ambiente natural do embrião. Para tanto, a viabilidade desses embriões (in vivo ou in vitro, oriundos de distintos sistemas de produção) pode ser mensurada por ferramentas diversas, tais como a criotolerância, a análise do metabolismo, os níveis e a expressão de genes. A suplementação protéica dos meios de cultivo tem sido amplamente discutida, na busca pela utilização de meios definidos, onde há o conhecimento da sua composição, possibilitando a eliminação ou acréscimo de produtos benéficos ao embrião, sem que ocorra influência de fatores inerentes desconhecidos do meio - características normalmente atribuídas aos componentes séricos, os quais são mais comumente utilizados, em especial o Soro Fetal Bovino (SFB) e a Albumina Sérica Bovina (BSA). Neste estudo, os efeitos do SFB e da BSA-faf durante a PIV de embriões bovinos, foram investigados quanto à quantidade na produção de blastocistos e em termos de qualidade, quando submetidos à vitrificação e análise de expressão gênica. Foram maturados, fecundados e cultivados in vitro 2. 171 ovócitos, oriundos de abatedouro. Em cada réplica, os CCOs foram. distribuídos em três tratamentos (T1: suplementação com SFB; T2. suplementação com BSA; T3: suplementação inicial com BSA e final com SFB.). Quanto à taxa de clivagem (02), não houve diferença entre os tratamentos; porém quanto às taxas de blastocisto, T1 foi superior aos T2 e T3 nos dias 6,5 a 8,5 de avaliação (P&lt0.001). Os embriões de todos os tratamentos que alcançaram estágio de BL e/ou BX (total de 507 embriões) nos dias 6,5 e 7,5 foram separados e, 50% deles, vitrificados pelo método da OPS, descongelados, retomando então ao CIV, e observados às 24, 48 e 72 horas pós-vitrificação; os outros 50% dos embriões permaneceram como grupo controle. Para esta análise, foram consideradas re-expansão e eclosão das estruturas analisadas como parâmetro de avaliação, mediante os fatores tratamento (T1 vs. T2 e T3), grupo (C vs. V), estágio embrionário (BL vs. BX) e tempo (06,5 vs. 07,5). Em suma, os resultados para o teste de criotolerância foram: T1=T2&gtT3; C&gtV; BX&gtBL; 06,5&gt07,5. Quatro pools com 9 blastocistos eclodidos do grupo controle em 08,5, de cada tratamento, foram formados para avaliação da expressão dos genes MnSOO, Bax, BCL-2, HSP-70, CIRP-b, ACAT-2 e A TP8A 1. Para normalização dos dados, foram utilizados os genes constitutivos Actina e GAPOH. A expressão da maioria dos genes não foi significativamente diferente entre T1 e T2, exceto para o ACAT-2 - o qual se diferenciou devido à composição protéica do meio. A menor expressão significativa no T3, pode indicar uma condição sub-ótima deste meio à PIV de embriões. A suplementação com SFB produziu mais embriões e com qualidade semelhante a aqueles produzidos em suplementação de BSA-faf. É possível, portanto, concluir que os componentes séricos presentes no soro não afetaram os parâmetros analisados neste. estudo. Possíveis efeitos no desenvolvimento embrionário avançado e fetal, bem como a variação entre as partidas de soro, devem ser analisados em outros experimentos.  aBovino  aEmbrião  aBSA  aCriotolerância  aQualidade embrionária  aSFB