02367nam a2200217 a 450000100080000000500110000800800410001910000200006024501550008026000650023530000090030049000940030952015750040365300290197865300450200765300310205265300140208370000150209770000170211270000200212911872282007-06-06       2005    bl uuuu     u0uu1 u    #d1 aFERREIRA, B. C.  aReplicação de um baculovírus recombinante contendo o gene rolA de Agrobacterium rhizogenes em cultura de células de inseto.h[electronic resource]  aBrasília: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologiac2005  a18p.  a(Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 111)  aAs características morfológicas conferidas a plantas infectadas por Agrobacterium rhizogenes têm como principal responsável o gene rolA. Entre as anomalias causadas por esse gene estão a redução do tamanho da planta, inibição do crescimento da raiz e retardo na floração. Em trabalhos anteriores foi construído um baculovírus recombinante com o gene rolA no locus do gene da poliedrina. O gene rolA foi clonado no vetor pFastBac HTb usado para transformação em células DH10Bac cells (Invitrogen), que contêm o genoma viral de Autographa californica Nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Este DNA viral recombinante foi cotransfectado em células de inseto Sf9 resultando em um vírus deficiente na produção da poliedrina, o qual foi chamado de v-rolA (Sihler et al, 2002). No presente trabalho foi investigada a infecção do vírus v-rolA nas diferentes linhagens celulares de Trichoplusia ni (Tn5B1-4) e de Spodoptera frugiperda, IPLB-SF-21AE e Sf9. O inóculo viral foi removido depois de uma hora de adsorção e as células foram incubadas em meio TNMFH a 27°C por 48h. O progresso de infecção foi monitorado por microscopia óptica. Alterações morfológicas como hipertrofia nuclear e formação de corpo denso foram observados nas células Tn5B1-4, SF21 e Sf9 após 24h. O DNA do vírus recombinante foi extraído de células infectadas, digeridas com enzima Pst I e amplificado através da técnica de PCR. As amostras de DNA foram analisadas por eletroforese em gel de agarose mostrando que o vírus se replicou em todas as linhagens celulares.  aAgrobacterium rhizogenes  aBaculovírus recombinante - replicação  aCélulas - inseto- cultura  aGene rolA1 aSIHLER, W.1 aCARNEIRO, M.1 aSOUZA, M. L. de