03287naa a2200349 a 450000100080000000500110000800800410001902400630006010000150012324501070013826000090024550001120025452022150036665000200258165000110260165000130261265000300262565000160265565000130267165000110268465000160269565000080271165000090271965000100272870000190273870000280275770000200278570000250280570000220283070000250285277300600287721556062023-08-03       2023    bl uuuu     u00u1 u    #d7 ahttps://doi. org/10.1590/S1678-3921.pab2023.v58.030002DOI1 aKOLTUN, A.  aCRISPR-transient expression in soybean for simplified gRNA screening in planta.h[electronic resource]  c2023  aTítulo em português: Expressão transiente de CRISPR em soja para triagem simplificada de gRNA na planta.  aABSTRACT - The objective of this work was to develop a method to create and validate CRISPR-Cas systems and different gRNAs in soybean (Glycine max) embryos. Two model genes were used for simple mutation with one gRNA or partial gene deletion with two guides. The gRNAs were inserted into the CRISPR transformation vectors by a type IIS restriction enzyme or by subcloning and inserting the promoter + gRNA2 in the final transformation vector using the classic restriction enzyme cloning method. The vectors were successfully constructed for one and two gRNAs. Agrobacterium-mediated transient transformation in soybean was carried out to test the quality of gRNAs and of the system itself (expression cassette). Simple mutation and gene deletion were detected in the embryos transformed after DNA enrichment by enzyme digestion followed by polymerase chain reaction and sequencing, which indicates that the CRISPR-Cas system and guides were working. This protocol can be used to accelerate CRISPR-based genome editing strategies for genetic transformation in soybean. RESUMO - O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método para criar e validar sistemas CRISPR-Cas e diferentes gRNAs em embriões de soja (Glycine max). Dois genes modelo foram usados para mutação simples com um gRNA ou deleção parcial do gene com dois guias. Os gRNAs foram inseridos nos vetores de transformação CRISPR por uma enzima de restrição do tipo IIS ou por subclonagem e inserção do promotor + gRNA2 no vetor de transformação final, com uso do método clássico de clonagem por enzimas de restrição. Os vetores foram construídos com sucesso para um e dois gRNAs. A transformação transiente de soja por Agrobacterium foi realizada para testar a qualidade dos gRNAs e do próprio sistema (cassete de expressão). Detectaram-se mutação simples e deleção gênica nos embriões transformados após o enriquecimento do DNA por digestão seguida de reação em cadeia da polimerase e sequenciamento, o que indica que o sistema CRISPR-Cas e os guias estavam funcionando. Este protocolo pode ser usado para acelerar as estratégias de edição de genoma baseadas em CRISPR, para transformação genética em soja.  aGenetic vectors  aGenome  aMutation  aPolymerase chain reaction  aRNA editing  aSoybeans  aGenoma  aGlycine Max  aRNA  aSoja  aVetor1 aSILVA, N. V. e1 aANGELOTTI-MENDONÇA, J.1 aMARIN, S. R. R.1 aGONÇALVES, L. S. A.1 aNEPOMUCENO, A. L.1 aMERTZ-HENNING, L. M.  tPesquisa Agropecuária Brasileiragv. 58, e03000, 2023.