02615nam a2200169 a 450000100080000000500110000800800410001910000210006024500860008126000620016730000150022949000820024452020630032665000090238970000250239870000220242321503512023-01-19       2022    bl uuuu     u0uu1 u    #d1 aSILVA, J. dos S.  aMetodologia para extração e detecção de dsRNA em solo.h[electronic resource]  aCruz das Almas, BA: Embrapa Mandioca e Fruticulturac2022  a20 p.cil.  a(Embrapa Mandioca e Fruticultura.Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 141).  aResumo - A tecnologia do RNA interferente (RNAi) tem sido uma das abordagens mais promissoras para a proteção de plantas contra pragas. O mecanismo é ativado por moléculas de RNA fita dupla (dsRNA). A aplicação de produtos formulados com dsRNA para o controle de pragas poderá ser realizado tanto via pulverização foliar ou diretamente no solo e ser absorvido pelas raízes. Estas duas formas de aplicação resultarão em potencial acúmulo de dsRNA no solo, o que levanta questionamentos quanto a possíveis efeitos adversos em organismos residentes no solo. Apesar de evidências sugerirem que o dsRNA aplicado ao solo é rapidamente degradado, é necessário que metodologias de extração e detecção de dsRNA no solo estejam disponíveis para que estudos de segurança ambiental possam ser conduzidos. Assim, o presente trabalho teve como objetivo estabelecer um método para extração e detecção de dsRNA no solo. Para isso, foram coletadas amostras de solo em duas profundidades (0-10 cm e 10-20 cm) e, após serem homogeneizadas, foi aplicada uma solução contendo 7,5 µg de dsRNA em uma amostra de 50 gramas de solo de cada profundidade. Cada uma destas amostras de solo foi dividida em subamostras de 1 grama, que foram mantidas no escuro a temperatura ambiente por diferentes períodos de incubação. Para extração do dsRNA, cada subamostra de solo foi ressuspendida em 10 mL de tampão PBS-T e o sobrenadante foi coletado e filtrado. Cerca de 100 µL do filtrado foi utilizado para extração de RNA total. A detecção do dsRNA foi realizada tanto pela técnica de transcrição reversa seguida pela Reação em cadeia da Polimerase (RT-PCR) quanto pela PCR em tempo real (RT-qPCR). Empregando a metodologia desenvolvida, foi possível extrair e detectar as moléculas de dsRNA até 136 horas após aplicação no solo, indicando que a metodologia foi eficiente na extração e detecção do dsRNA no solo. Além dis so, a molécula pode se manter detectável no solo por períodos mais longos que os avaliados neste trabalho.  aSolo1 aFONSECA, M. L. da S.1 aANDRADE, E. C. de