03143nam a2200193 a 450000100080000000500110000800800410001910000220006024501890008226000160027130000110028750002460029852023090054465000130285365000120286665000170287865000260289565300280292120671502017-03-16       1996    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aRIBEIRO, M. C. M.  aIdentificação por DDRT-PCR e sequenciamento parcial de um gene de expressão diferencial de feijão silvestre (Phaseolus vulgaris)bPossivel envolvimento na resistência a carunchos.  a1996.c1996  a110 f.  aDissertação de mestrado (Mestrado em Ciências Biológicas (Biologia Molecular)) - Universidade de Brasília. Orientadora: Maria Fátima Grossi de Sá, Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia; co-orientadora: Maria Sueli Soares Felipe.  aO feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris) é uma espécie cultivada e consumida amplamente, representando uma leguminosa de considerável importância econômica. Danos causados aos grãos de feijão armazenados por ataque de carunchos (Zabrotes subfasciatus e Acanthoscelides obtectusy) ocasionam perdas de 25-40% (F AO, 1977). Linhagens de feijão silvestre com níveis de resistência representativos ao ataque de carunchos são importantes fontes de estudos. Em P. vulgaris foi identificada uma proteina, Arcelina, responsável pela resistência ao caruncho Zabrotes subfasciatus. Apesar da existência de fontes de resistência a A. obtectus em acessos silvestres de Phaseolus acutitotius os fatores envolvidos ainda não foram elucidados. Aqui reportamos a utilização da técnica de DDRT-PCR (- "Differential Display Reverse Transcripase-Polymerase Chain Reaction") na identificação de genes de expressão diferencial potencialmente envolvidos na resistência a A. obtectus. O mRNA de sementes de P. acutifolius coletadas dezoito dias após floração foi examinado para identificar genes expressos especificamente em acesso resistente (G40102). O mRNA foi utilizado como 'template' para sintese de cDNA fita simples utilizando primers âncora 3' oligo-dT degenerados com duas bases terminais 3' (T12MV, onde M = A, C ou G; e V = A, C, G ou T). Os produtos de amplificação via PCR das populações de cDNA foram gerados através da utilização de primers randômicos 5' em combinação com o primer 3' usado no passo de transcrição reversa. Foram identificadas sete bandas potencialmente diferenciais, das quais apenas uma (fragmento DDRT -I) apresentou expressão específica, comprovada por 'Northern Blot'. Hibridizações de 'Southern blotting comprovaram que o fragmento não representa um polimorfismo. O fragmento DDRT-I foi identificado no DNA genômico e a região correspondente clonada. O clone genômico pFej 1 foi isolado e caracterizado. Estudos de homologia a nível de seqüência protéica deduzida revelaram similaridade significativa com fitohemaglutininas E e L, bem como com inibidor de a-amilase. O gene identificado apresenta grande potencial para utilização do mesmo como marcador molecular para mapeamento de genes de resistência ao ataque de carunchos em feijão.  aCaruncho  aFeijão  aResistência  aZabrotes Subfasciatus  aAcanthoscelide obtectus