02898nam a2200181 a 450000100080000000500110000800800410001910000200006024501470008026000160022750002290024352021370047265000200260965300240262965300340265365300090268765300200269620606582017-11-27       2016    bl uuuu  m   00u1 u    #d1 aSOUZA, E. B. de  aCaracterização biológica e molecular de isolados de Apple stem grooving virus e construção de um clone infeccioso.h[electronic resource]  a2016.c2016  aTese (Doutorado em Fitossanidade) - Universidade Federal de Pelotas, Programa de pós-graduação em Fitossanidade. Orientador: Profª. Dra. Danielle Ribeiro de Barros Coorientadores: Dr. Osmar Nickel e Dr. Cesar Bauer Gomes  aO Apple stem grooving virus (ASGV), espécie tipo do gênero Capillovirus, é conhecido como um vírus latente causador do acanelamento do lenho da macieira, devido ao principal sintoma observado em espécies suscetíveis, infecção podendo levar à perda de qualidade de frutos e queda na produtividade. O vírus já foi diagnosticado em diversas partes do mundo e atualmente, existem depositados no GenBank, dezoito sequências de genomas completos de isolados de ASGV, e várias sequências parciais principalmente da região da capa proteica. O presente trabalho está dividido em dois capítulos. O capítulo l teve como objetivo a caracterização biológica e molecular de dois isolados de ASGV (M219-3 e M220), e de forma mais específica, a clonagem e sequenciamento do genoma completo dos mesmos e a análise filogenética em comparação com demais sequências disponíveis. Os fragmentos foram amplificados por RT-PCR, clonados, sequenciados e analisados com os programas Clustal W e Lasergene. O capítulo ll teve como objetivo a construção de um clone infeccioso, a partir do isolado M220, utilizando-se a técnica Gibson Assembly. Ambos isolados apresentaram-se de forma similar quanto a expressão de sintomas morfológicos. Os resultados obtidos permitiram a obtenção das primeiras sequências genômicas completas de isolados brasileiros de ASGV, bem como a construção de um clone infeccioso. A identidade entre M219-3 e M220 foi de 92.2%, quando comparada a sequência de nucleotídeos, e 95.3% e 93.3%, quando comparadas as sequencias de aminoácidos da proteína de movimento e capsídeo, respectivamente. A análise filogenética da proteína de movimento dos isolados com as sequências depositadas determinou dois grupos distintos quanto ao hospedeiro. M219-3 e M220 agruparam-se juntamente com isolados cujo os hospedeiros eram predominantemente maça e pera. Dada a relevância da infecção causada por esse vírus, o trabalho contribuirá para estudos da variabilidade genética dessa espécie viral, bem como para a elucidação da associação do ASGV com a patologia já relatada na literatura.  aMalus Domestica  aASGV-sequenciamento  aCapillovirus Betaflexiviridae  aCDNA  aGibson Assembly