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Registro Completo
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Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
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Data corrente: |
03/06/2015 |
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Data da última atualização: |
26/04/2024 |
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Autoria: |
CAITANO, M. A. B.; JANK, C. C.; SANTOS, L. R. dos; SOARES, C. O.; ROSINHA, G. M. S. |
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Afiliação: |
MARRIELEN APARECIDA BENITES CAITANO, UNIVERSIDADE PARA O DESENVOLVIMENTO DO ESTADO E DA REGIÃO DO PANTANAL; CARINA CALIXTO JANK, UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL; LENITA RAMIRES DOS SANTOS, CNPGC; CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC; GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC. |
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Título: |
Clonagem e expressão heteróloga do gene pgk de Brucella abortus. |
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Ano de publicação: |
2013 |
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Fonte/Imprenta: |
Bio(in)formação, v. 6, n. 6, 2013. |
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Páginas: |
p. 249-266 |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
A brucelose é uma das doenças emergentes mais importantes mundialmente na atualidade, afetando diversas espécies animais e o homem. A situação brasileira no controle de doenças infecciosas de animais requer melhorias para atingir os padrões internacionais e aumentar a produção. Por estes motivos o MAPA vem incentivado o desenvolvimento de novas vacinas e formas de diagnósticos para a brucelose bovina. Enzimas metabólicas têm sido descritas no envolvimento da virulência de Brucella abortus. Uma delas é a fosfoglicerato cinase (PGK), codificada pelo gene pgk. Neste trabalho objetivou-se a produção da proteína recombinante PGK (PGKr) de B. abortus em sistema heterólogo de expressão, para caracterização da cepa vacinal geneticamente modificada, B. abortus 2308 p r 8 pgk por western blot e posterior utilização em testes sorológicos. Para isto, foi realizada a extração de DNA genômico da cepa S2308 de B. abortus e o gene pgk foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a partir de primers específicos. O produto da PCR foi ligado ao plasmídeo pMAL-c2E. O clone recombinante, foi submetido à indução da produção da proteína em Escherichia coli. A PGKr foi purificada por cromatografia de afinidade e duas frações purificadas foram dosadas por Bradford, obtendo-se 2,62 mg da PGKr. Camundongos BALB/c foram injetados com a proteína emulsionada em adjuvante Montanide, via subcutânea. Foram realizadas três inoculações com intervalos de três semanas. Quinze dias após as inoculações, os soros sanguíneos destes animais foram coletados e separados para avaliação pelo método de Western Blot. Os soros confirmaram a produção de anticorpos contra o antígeno e pode-se observar que no ensaio com a cepa selvagem o anticorpo reagiu mostrando que a produção da proteína PGK está intacta nesta cepa e com a cepa mutante S2308 08 pgk o anticorpo não reagiu, mostrando que a produção da proteína PGK é nula, confirmando realmente a deleção do gene pgk nesta cepa. MenosA brucelose é uma das doenças emergentes mais importantes mundialmente na atualidade, afetando diversas espécies animais e o homem. A situação brasileira no controle de doenças infecciosas de animais requer melhorias para atingir os padrões internacionais e aumentar a produção. Por estes motivos o MAPA vem incentivado o desenvolvimento de novas vacinas e formas de diagnósticos para a brucelose bovina. Enzimas metabólicas têm sido descritas no envolvimento da virulência de Brucella abortus. Uma delas é a fosfoglicerato cinase (PGK), codificada pelo gene pgk. Neste trabalho objetivou-se a produção da proteína recombinante PGK (PGKr) de B. abortus em sistema heterólogo de expressão, para caracterização da cepa vacinal geneticamente modificada, B. abortus 2308 p r 8 pgk por western blot e posterior utilização em testes sorológicos. Para isto, foi realizada a extração de DNA genômico da cepa S2308 de B. abortus e o gene pgk foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a partir de primers específicos. O produto da PCR foi ligado ao plasmídeo pMAL-c2E. O clone recombinante, foi submetido à indução da produção da proteína em Escherichia coli. A PGKr foi purificada por cromatografia de afinidade e duas frações purificadas foram dosadas por Bradford, obtendo-se 2,62 mg da PGKr. Camundongos BALB/c foram injetados com a proteína emulsionada em adjuvante Montanide, via subcutânea. Foram realizadas três inoculações com intervalos de três semanas. Quinze dias após as inoculaçõ... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Fosfoglicerato cinase. |
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Thesagro: |
Bovino; Brucelose; Clonagem. |
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Thesaurus NAL: |
Brucellaceae. |
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Categoria do assunto: |
-- |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/124979/1/18.pdf
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Marc: |
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