Data/hora: 08/06/2024 07:30:02

Biblioteca(s): | Embrapa Gado de Leite.
Tipo da produção científica: | Comunicado Técnico/Recomendações Técnicas
Data corrente: | 25/03/2008
Data da última atualização: | 21/09/2023
Autoria: | BRESOLIN-SOARES, A. P.; CASTRO, C. M.; OLIVEIRA, A. C. de; MITTELMANN, A.; ANTHONISEN, D.; NOLASCO, G. da S.; SILVA, V. N.
Afiliação: | Adriana Pires Bresolin Soares, UFPEL; Caroline Marques Castro, Embrapa Clima Temperado; Antonio Costa de Oliveira, UFPEL; Andréa Mittelmann, Embrapa Gado de Leite; Denilson Anthonisen, Embrapa Clima Temperado; Vanessa Neumann Silva, UFPEL.
Título: | Otimização de protocolo para análise de AFLP em Lolium multiflorum Lam.
Ano de publicação: | 2007
Fonte/Imprenta: | Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2007.
Páginas: | 8 p.
Série: | (Embrapa Clima Temperado. Comunicado Técnico, 179).
Idioma: | Português
Conteúdo: | ESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA ANÁLISE MOLECULAR DE AZEVÉM ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracterização de recursos genéticos, como a detecção de grande número de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e considerável reprodutibilidade, além de não necessitar de dados de seqüenciamento prévio da espécie para a construção de primers. Embora a análise de AFLP seja freqüentemente utilizada em estudos de variabilidade genética em diferentes espécies, o uso da técnica em Lolium multiflorum ainda é incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da técnica de AFLP em azevém anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentrações iniciais de DNA genômico de 100 e 250 ng, a digestão do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digestão: 3, 6 e 12 horas. Também foram avaliadas quatro concentrações da solução resultante da ligação dos adaptadores: solução sem diluição; diluída 1:5; 1:10 e 1:20 e duas diluições após a reação de pré-amplificação, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior número e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentração inicial de DNA genômico de 100 ng, num volume final de reação de digestão 10 ?l, com 1U de cada enzima EcoRI e MseI e tempo de reação de 12h a 37°C, com reação de ligação de adaptadores realizada com a adição da solução de ligação de adaptadores, do Kit AFLP? Analysis System I (InvitroGen Life Technologies, Carlsbad, Calif., USA), e 0,4 U de T4 DNA ligase em um volume final de 10?l, por 2h a 20°C. Após a ligação de adaptadores a diluição deverá ser de 1:5. A reação de pré-amplificação deverá ocorrer a partir de 1?l desta última solução (diluída 1:5), 1,0 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 7.6) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA 0,003% e 1 U de Taq DNA polimerase, completando com mix de pré-amplificação do Kit AFLP? Analysis System I até alcançar o volume final de 11?l. O produto da pré-amplificação deverá ser diluído 1:25 antes de ser procedida à amplificação seletiva, a qual deve ser realizada utilizando 2,5 ?l da solução de DNA pré-amplificado (diluído 1:25), 1 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 8,4) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA (0,003%), 1 U de Taq DNA polimerase, 10 ng de primer EcoRI, 1,5 ng de primer MseI, 0,4mM de DNTps e H2O MilliQ? até completar o volume final de 10?l. Com este protocolo uma única combinação de primers permitiu identificar 58 bandas polimórficas na análise de duas populações de azevém anual.
Palavras-Chave: | Protocolo.
Thesagro: | Análise; Azevém.
Categoria do assunto: | F Plantas e Produtos de Origem Vegetal
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/CNPGL/15618/1/comunicado_179.pdf
Registro original: | Embrapa Gado de Leite (CNPGL)
Exemplares: | CNPGL - (15618-1) - UPC - FL - PP - FL 3230 P. 189 -  - 3230 - DIS