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Biblioteca(s): | Embrapa Agrobiologia.
Data corrente: | 10/06/2005
Data da última atualização: | 28/04/2010
Autoria: | DE SOUZA, F. A.
Título: | Identificação molecular e caracterização da diversidae de espécies de fungos micorrízicos arbusculares do gênero Gigaspora por PCR-DGGE (Denaturing Gradient Gel Electrophoresis).
Ano de publicação: | 2005
Fonte/Imprenta: | Seropédica: Embrapa Agrobiologia, 2005.
Páginas: | 51 p.
Série: | (Embrapa Agrobiologia. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 6).
ISSN: | 1676-6709
Idioma: | Português
Conteúdo: | Metodologia. estirpes de fungos MA avaliadas. Amostras de solo. Extração e preparação de esporos para análise de DNA. Experimento teste de PCR para verificar a especificidade dos "primers" para a família Gigasporaceae. Experimento de casa-de-vegetação. Amplificação de DNA de esporos utilizando um PCR em "nested". PCR utilizando primers específicos para análise de comunidades de fungos MA da família Gigasporaceae. Análise . T. S. C. Análise de DGGE. Teste de reprodutibilidade. Seqüenciamento de DNA a apartir da recuperação de DNA de bandas de géis de DGGE. Clonagem do rDNA de fungos MA. Seleção de clones via PCR-DGGE e seqüenciamento de DNA. Alinhamento de seqüências. Número de acesso no EMBL das seqüências de nucleotídeos obtidas neste projeto. Resultados. Perfil de DGGE obtidos da região V3-V4 do 18S rDNA. Perfil de DGGE obtidos da região V9 do 18S rDNA. Análise das seqüências obtidas dos perfis de bandas do PCR-DGGE. Detecção de espécies de Gigasporaceae em amostras de campo discussão. PCR-DGGE como ferramenta para caracterização, identificação de espécies de Gigasporaceae. Comparação entre os resultados obtidos com a amplificação de DNA obtidos de um ou de múltiplos esporos e diversidade geográfica das estirpes analisadas. Caracterização de espécies de Gigaspora por PCR-DGGE versus outros procedimentos aplicados previamente. Implicações da heterogeneidade entre cópias do 18rDNA em uma mesma espécies (genoma) para estudos microbiana molecular e para estudos de genética evolutiva. Fungos micorrízicos arbusculares são importantes para o funcionamento da maioria dos ecossistemas terrestre, apesar disso, a ecologia, genética e evolução deste fungos é pouco conhecida, devido, parcelamento, a dificuldades associadas com a detecção e Identificação de espécies. A variação inter - e intra-específica de genes do 18rRNA de espécies do gênero Gigasporaceae foi avaliada para testar o uso deste marcador para a discriminação de isolados de Gigaspora e para a detecção de populações de Gigasporaceae em amostras ambientais. Avaliação de 48 isolados de Gigaspora por PCR-DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) revelou que a região V3-V4 do gene do 18rRNA não contém variação suficiente para a discriminação entre espécies diferentes de Gigaspora. Em contrate com sete resultado, os padrões obtidos para a regiãoV9 deste gene possibilitaram a identificação confiável para todas as espécies reconhecidas neste gênero. Além disso, o perfis de PCR-DGGE forneceram subsídio para identificação de possível erros de identificação feitos com base na morfologia dos esporos. E puderam ser utilizados para diferenciar alguns isolados geográficos das espécies G. albida, G. gigantea e G. margarita, mas não para G. rosea. Com base nos perfis de bandas de DGGE dos genes ribosomais das espécies estudadas, dois agrupamentos ficaram aparentes, um composto por isolados de G. albida, G. candida, G. ramisporophora e G. rosea. E outros composto por isolados de G. decipiens e G. margarita. O estudo individual de bandas de DGGE obtidos Para cada isolado, através de clonagem, seleção de clones por DGGE e sequenciamento, confirmou estes agrupamento e revelou que algumas copias do gene rRNA são comuns entre espécies diferentes. Das 48 culturas avaliadas, somente duas apresentaram alguma variação entre esporos obtidos da mesma amostra, estas exceções podem estar indicando o co-isolamento de mais de uma espécies ou subespécie nestas culturas. A análise de dois solos agrícolas brasileiros com PCR em "nested" específico para a família Gigasporaceae revelou a dominância de G. margarita nas amostras.
Thesagro: | Biologia Molecular; Micorriza Vesicular Arbuscular.
Thesaurus Nal: | molecular biology; vesicular arbuscular mycorrhizae.
Categoria do assunto: | --
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/CNPAB-2010/32543/1/bot006.pdf
Registro original: | Embrapa Agrobiologia (CNPAB)
Exemplares: | CNPAB - (32543-1) - UPC - LV - -- - 572.8 - D467i - 0004263 - DIS