Data/hora: 06/06/2024 18:07:00

Biblioteca(s): | Embrapa Unidades Centrais.
Data corrente: | 16/06/2016
Data da última atualização: | 29/12/2017
Autoria: | RIBEIRO, E. L.; OLIVEIRA, A. G. G.; LAGUARDIA-NASCIMENTO, M.; MATA, C. P. S. M. da; REIS, J. K. P. dos; FONSECA JÚNIOR, A. A.
Afiliação: | EDUARDO L. RIBEIRO, MAPA; ANNA G. G. OLIVEIRA, MAPA; MATEUS LAGUARDIA-NASCIMENTO, MAPA; CAMILA PACHECO SILVEIRA MARTINS DA MATA, UFMG; JENNER K. P. DOS REIS, UFMG; ANTÔNIO A. FONSECA JÚNIOR, MAPA.
Título: | Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR em tempo real (qPCR) para diagnóstico de peste suína africana.
Ano de publicação: | 2016
Fonte/Imprenta: | Pesquisa Veterinária Brasileira, Rio de Janeiro, v. 36, n. 6, p. 473-478, junho. 2016.
Idioma: | Português
Conteúdo: | Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.
Palavras-Chave: | PCR real-time; Validação; Validation.
Thesagro: | Peste suína africana.
Thesaurus Nal: | African swine fever virus.
Categoria do assunto: | --
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/144461/1/Estudo-comparativo.pdf
Registro original: | Embrapa Unidades Centrais (AI-SEDE)
Exemplares: | AI-SEDE - (59638-1) - UPE - AP - PP - 636.08905 - P474 -  - DIS