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Biblioteca(s): | Embrapa Soja.
Data corrente: | 08/02/2010
Data da última atualização: | 18/04/2011
Autoria: | OLIVEIRA, L. R. de.
Afiliação: | LUCIANA RUANO DE OLIVEIRA, UEL - Mestranda.
Título: | Análise da expressão dos genes nodC e nodG de Rhizobium tropici sob indução com flavonóides pela técnica de PCR quantitativo.
Ano de publicação: | 2009
Fonte/Imprenta: | 2009.
Páginas: | 76 f.
Idioma: | Português
Notas: | Dissertação (Mestrado em Microbiologia) - Universidade Estadual de Londrina, Londrina.
Conteúdo: | O estabelecimento da simbiose rizóbio-leguminosa inicia-se com a excreção, pela planta hospedeira, de compostos de ação quimiotática sobre o rizóbio, facilitando a colonização rizosférica e estimulando o crescimento da bactéria. Geralmente, estes compostos excretados são açúcares, aminoácidos e ácidos dicarboxílicos, que promovem a adesão dos rizóbios aos pelos radiculares das plantas. Simultaneamente a esta adesão, tem início uma troca de sinais moleculares entre o microssimbionte e a planta hospedeira, que libera compostos fenólicos, principalmente flavonóides, responsáveis pela indução da transcrição de genes bacterianos essenciais à nodulação (genes nod, nol e noe). Os rizóbios produzem, então, por meio dos genes de nodulação, os fatores de nodulação (fatores Nod), que são oligossacarídeos lipoquitínicos (LCOs) que induzem modificações radiculares no estágio de pré-infecção, essenciais à infecção do rizóbio para a formação do nódulo e posterior fixação do nitrogênio (N2). O gene nodC é responsável pela biossíntese da estrutura básica do fator Nod, mais especificamente, é responsável pelo controle da etapa de elongação da cadeia principal oligossacarídica. Já o gene nodG é um gene específico do hospedeiro (hsn), responsável pela modificação no esqueleto oligossacarídico do fator Nod. Neste estudo foi relatada a resposta transcricional dos genes nodC e nodG na estirpe PRF 81 de Rhizobium tropici, após indução com naringenina e exsudato de sementes de feijão, pela técnica de PCR quantitativo (RT-qPCR). Deste modo, diferentes tratamentos de indução dos genes nod foram realizados. No primeiro experimento, os genes nodC e nodG foram induzidos com naringenina ou exsudato de sementes de feijão por um período de 48 h. Já no segundo experimento, após as células bacterianas atingirem a fase exponencial de crescimento, foi realizado o processo de indução dos genes nod, sendo aplicados os seguintes tempos: 5 min, 15 min, 1 h, 4 h e 8 h. Em seguida, procedeu-se à extração do RNA total de todas as culturas. Os níveis de expressão gênica diferencial foram calculados aplicando-se o método 2- 2 - ^^Ct (Livak and Schmittgen, 2001) e a análise dos dados foi feita por estatística descritiva, onde a reprodutibilidade e precisão dos valores de RQ obtidos foram estimados pelos desvios padrão (SD) e coeficiente de variação (CV%) em cada corrida e entre as corridas. Também foi utilizado o programa REST 2008 (Relative Expression Software Tool), versão 2.0.7 (Pfaffl et al., 2002; http://www.gene-quantification.info), o qual testa as diferenças para significância através de um teste randômico, baseado em iterações. Em todas as reações foi utilizado o gene ribossômico 16S como normalizador. Os resultados da quantificação relativa mostraram que, após 5 min de incubação, ambos os genes foram significativamente induzidos pelo exsudato, com valores 121,97 e 14,86 superiores ao controle, respectivamente. Níveis de expressão inferiores foram observados na presença de naringenina, além disso, a expressão máxima na presença desse indutor foi verificada somente após 8 h de incubação. Esses resultados sugerem que o exsudato de sementes de feijão revelam maior potencial para uma imediata indução dos genes nod em R. tropici PRF 81.
Palavras-Chave: | Genes de nodulação; Microorganismo; Microorganismos fixadores de nitrogênio.
Thesagro: | Bacteriologia do solo; Biologia do solo; Fixação simbiótica de nitrogênio; Microbiologia do solo; Phaseolus vulgaris.
Thesaurus Nal: | Nitrogen-fixing bacteria; Rhizobium tropici; Soil bacteria; Soil biology; Soil microorganisms.
Categoria do assunto: | P Recursos Naturais, Ciências Ambientais e da Terra
Registro original: | Embrapa Soja (CNPSO)
Exemplares: | CNPSO - (30280-1) - UPA - TS - PP - 18/2009 -  - 18/2009 - DIS