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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
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Data corrente: |
07/04/2010 |
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Data da última atualização: |
07/04/2010 |
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Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
FARIAS, T. A.; ARAUJO, F. R.; OSÓRIO, A. L. A. R.; JORGE, K. S. G.; RAMOS, C. A. N.; SOUZA, I. I. F.; OLIVEIRA, R. H. M. de; AZAMBUJA, A.; ROSINHA, G. M. S.; SOARES, C. O.; ELISEI, C. |
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Afiliação: |
Thaís A. Farias, UFMS; FLABIO RIBEIRO ARAUJO, CNPGC; Ana Luíza A. R. Osório, UFMS; Kláudia S. G. Jorge, UFMS; Carlos A. N. Ramos, CNPGC; Ingrid I. F. Souza, CNPGC; RENATO HENRIQUE MARCAL DE OLIVEIRA, CNPGC; Alexandre Azambuja, UFMS; GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC; CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC; CARINA ELISEI, CNPGC. |
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Título: |
ELISA based on recombinant MPB70 to detect antibodies to Mycobacterium bovis. |
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Ano de publicação: |
2009 |
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Fonte/Imprenta: |
In: SIMPÓSIO EMBRAPA LABEX DE SANIDADE ANIMAL, 1., 2009, Campo Grande, MS. Anais... Campo Grande, MS: Embrapa Gado de Corte, 2009. |
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Páginas: |
1 p. |
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Descrição Física: |
1 CD-ROM. |
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Idioma: |
Inglês |
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Conteúdo: |
Bovine tuberculosis is an important infectious disease, caused by Mycobacterium bovis. The gene that encodes for MPB70 protein is present in the genome of M. bovis and has high specificity for the M. tuberculosis complex, representing a potential antigen for the diagnosis of bovine tuberculosis. The objective of this work was to develop an ELISA using recombinant protein MPB70 of M. bovis in order to detect antibodies against these bacteria in cattle. The gene mpb70 was amplified by PCR and cloned into plasmid pGEM-T Easy. After digestion with the Eco RI enzyme, the gene was subcloned into the expression plasmid pGEX-3X. The expression of the gene was verified by SDS-PAGE and Western blot with anti-glutathione-S-transferase. After standardization of the ELISA, serum samples of positive (53), negative (37) or inconclusive (47) cattle in the tuberculin test were tested. In SDS-PAGE, a recombinant protein of approximately 48 kDa was detected, which corresponds to the estimated molecular weight of GST/MPB70. In Western blot, recombinant MPB70, fused to GST, was recognized by anti-GST antibody, confirming the expression of the gene. For the ELISA with recombinant MPB70, the sensitivity and specificity found were 88.7% and 94.6%, respectively. The use of a serological test such as ELISA with recombinant MPB70, together with the cellular tests, may solve some of the problems found in the control programs of bovine tuberculosis, like inconclusive results and the lack of detection of anergic animals in advanced stages of the disease. MenosBovine tuberculosis is an important infectious disease, caused by Mycobacterium bovis. The gene that encodes for MPB70 protein is present in the genome of M. bovis and has high specificity for the M. tuberculosis complex, representing a potential antigen for the diagnosis of bovine tuberculosis. The objective of this work was to develop an ELISA using recombinant protein MPB70 of M. bovis in order to detect antibodies against these bacteria in cattle. The gene mpb70 was amplified by PCR and cloned into plasmid pGEM-T Easy. After digestion with the Eco RI enzyme, the gene was subcloned into the expression plasmid pGEX-3X. The expression of the gene was verified by SDS-PAGE and Western blot with anti-glutathione-S-transferase. After standardization of the ELISA, serum samples of positive (53), negative (37) or inconclusive (47) cattle in the tuberculin test were tested. In SDS-PAGE, a recombinant protein of approximately 48 kDa was detected, which corresponds to the estimated molecular weight of GST/MPB70. In Western blot, recombinant MPB70, fused to GST, was recognized by anti-GST antibody, confirming the expression of the gene. For the ELISA with recombinant MPB70, the sensitivity and specificity found were 88.7% and 94.6%, respectively. The use of a serological test such as ELISA with recombinant MPB70, together with the cellular tests, may solve some of the problems found in the control programs of bovine tuberculosis, like inconclusive results and the lack of detection of... Mostrar Tudo |
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Thesagro: |
Diagnostico; Elisa; Mycobacterium Bovis; Sanidade Animal. |
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Categoria do assunto: |
H Saúde e Patologia |
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
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Biblioteca |
ID |
Origem |
Tipo/Formato |
Classificação |
Cutter |
Registro |
Volume |
Status |
URL |
Voltar
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Registro Completo
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Biblioteca(s): |
Embrapa Caprinos e Ovinos. |
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Data corrente: |
09/11/2010 |
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Data da última atualização: |
23/09/2019 |
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Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
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Autoria: |
SOUZA, B. M. P. S.; ALMEIDA, M. A. O; VIEIRA, L. da S.; NISHI, S. M.; MADRUGA, C. R. |
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Afiliação: |
UFBA, Salvador, BA; UFBA, Salvador, BA; LUIZ DA SILVA VIEIRA, CNPC; UFBA, Salvador, BA; UFBA, Salvador, BA. |
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Título: |
Expressão do gene para conglutinina em tecido abomasal de caprinos com infecção por nematódeos gastrintestinais. |
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Ano de publicação: |
2010 |
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Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...] Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 f. 1 CD-ROM. |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
O parasitismo por nematódeos gastrintestinais (NGIs) não ocorre de maneira uniforme dentro dos rebanhos caprinos. Diferentes níveis de infecção e gravidade de sintomas são observados dentro da mesma faixa etária, padrão racial e condições de criação dos animais. A variabilidade a esta resposta individual está associada a fatores hereditários e a mecanismos imunes. As conglutininas são proteínas pertencentes ao grupo das colectinas que participam na defesa não específica contra as infecções, agindo na ativação do sistema complemento e estimulação do processo de fagocitose através do reconhecimento de padrões moleculares de carboidratos associados a patógenos. Para investigar a participação das conglutininas na resistência às infecções por NGIs, avaliou-se a expressão gênica em tecido abomasal de caprinos com potencial para resistência (R) e suscetibilidade (S) aos NGIs. Caprinos F2 gerados por cruzamento das raças Anglo-nubiana x Saanen, com aproximadamente quatro meses idade foram submetidos a tratamento anti-helmíntico, colocados em pastagem contaminada e monitorados semanalmente por meio de exames coproparasitológicos (contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e identificação de larvas). Os animais foram submetidos a novo tratamento ao atingir OPG superiores a 800. Ao final do período de desafio a campo e dois tratamentos, amostras de tecido abomasal de cinco animais com média de 1281 ± 182 OPG e outros cinco com 407 ± 86 OPG foram submetidos a testes quanto à expressão do gene para conglutinina. Após a extração do RNA pelo método do reagente Trizol (Invitrogen) e tratamento com DNase, realizou-se a reação de transcrição reversa (Superscript III) utilizando OligodT e inibidores de RNase. A determinação da expressão gênica foi feita por meio de PCR em tempo real utilizando sondas do tipo TaqMan e tampão universal (Applied Biosystems). Quatro dos cinco caprinos do grupo R apresentaram amplificação positiva para o gene da conglutinina, enquanto que todos do grupo S mantiveram-se negativos. A detecção da expressão do gene da conglutinina nos animais com baixo OPG e a ausência da expressão nos animais com elevado OPG são sugestivos da possível participação da conglutinina nos mecanismos de defesa contra a infecção por NGIs. MenosO parasitismo por nematódeos gastrintestinais (NGIs) não ocorre de maneira uniforme dentro dos rebanhos caprinos. Diferentes níveis de infecção e gravidade de sintomas são observados dentro da mesma faixa etária, padrão racial e condições de criação dos animais. A variabilidade a esta resposta individual está associada a fatores hereditários e a mecanismos imunes. As conglutininas são proteínas pertencentes ao grupo das colectinas que participam na defesa não específica contra as infecções, agindo na ativação do sistema complemento e estimulação do processo de fagocitose através do reconhecimento de padrões moleculares de carboidratos associados a patógenos. Para investigar a participação das conglutininas na resistência às infecções por NGIs, avaliou-se a expressão gênica em tecido abomasal de caprinos com potencial para resistência (R) e suscetibilidade (S) aos NGIs. Caprinos F2 gerados por cruzamento das raças Anglo-nubiana x Saanen, com aproximadamente quatro meses idade foram submetidos a tratamento anti-helmíntico, colocados em pastagem contaminada e monitorados semanalmente por meio de exames coproparasitológicos (contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e identificação de larvas). Os animais foram submetidos a novo tratamento ao atingir OPG superiores a 800. Ao final do período de desafio a campo e dois tratamentos, amostras de tecido abomasal de cinco animais com média de 1281 ± 182 OPG e outros cinco com 407 ± 86 OPG foram submetidos a testes quanto à expressão do... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Colectina; Conglutinina; Nematódeo gastrintestinal; RT-PCR. |
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Thesagro: |
Caprino; Doença animal; Resistência. |
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Categoria do assunto: |
L Ciência Animal e Produtos de Origem Animal |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/27611/1/RAC-Expressao-do-gene-para-conglutinina.pdf
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Marc: |
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520 $aO parasitismo por nematódeos gastrintestinais (NGIs) não ocorre de maneira uniforme dentro dos rebanhos caprinos. Diferentes níveis de infecção e gravidade de sintomas são observados dentro da mesma faixa etária, padrão racial e condições de criação dos animais. A variabilidade a esta resposta individual está associada a fatores hereditários e a mecanismos imunes. As conglutininas são proteínas pertencentes ao grupo das colectinas que participam na defesa não específica contra as infecções, agindo na ativação do sistema complemento e estimulação do processo de fagocitose através do reconhecimento de padrões moleculares de carboidratos associados a patógenos. Para investigar a participação das conglutininas na resistência às infecções por NGIs, avaliou-se a expressão gênica em tecido abomasal de caprinos com potencial para resistência (R) e suscetibilidade (S) aos NGIs. Caprinos F2 gerados por cruzamento das raças Anglo-nubiana x Saanen, com aproximadamente quatro meses idade foram submetidos a tratamento anti-helmíntico, colocados em pastagem contaminada e monitorados semanalmente por meio de exames coproparasitológicos (contagem de ovos por grama de fezes (OPG) e identificação de larvas). Os animais foram submetidos a novo tratamento ao atingir OPG superiores a 800. Ao final do período de desafio a campo e dois tratamentos, amostras de tecido abomasal de cinco animais com média de 1281 ± 182 OPG e outros cinco com 407 ± 86 OPG foram submetidos a testes quanto à expressão do gene para conglutinina. Após a extração do RNA pelo método do reagente Trizol (Invitrogen) e tratamento com DNase, realizou-se a reação de transcrição reversa (Superscript III) utilizando OligodT e inibidores de RNase. A determinação da expressão gênica foi feita por meio de PCR em tempo real utilizando sondas do tipo TaqMan e tampão universal (Applied Biosystems). Quatro dos cinco caprinos do grupo R apresentaram amplificação positiva para o gene da conglutinina, enquanto que todos do grupo S mantiveram-se negativos. A detecção da expressão do gene da conglutinina nos animais com baixo OPG e a ausência da expressão nos animais com elevado OPG são sugestivos da possível participação da conglutinina nos mecanismos de defesa contra a infecção por NGIs.
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Registro original: |
Embrapa Caprinos e Ovinos (CNPC) |
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