| |
|
|
|
Registro Completo |
|
Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Corte. |
|
Data corrente: |
28/01/2011 |
|
Data da última atualização: |
22/02/2011 |
|
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
|
Autoria: |
SANTOS JUNIOR, A. G.; CUNHA, R. C.; ANDREOTTI, R.; LEITE, F. P. L. |
|
Afiliação: |
CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS; BOLSISTA CNPGC; RENATO ANDREOTTI E SILVA, CNPGC; CENBIOT/UFPEL, PELOTAS, RS. |
|
Título: |
Avaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris. |
|
Ano de publicação: |
2010 |
|
Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM. |
|
Páginas: |
1 p. |
|
Idioma: |
Português |
|
Conteúdo: |
A proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo. MenosA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30... Mostrar Tudo |
|
Palavras-Chave: |
Bm86-CG; Precipitação. |
|
Thesagro: |
Proteína. |
|
Categoria do assunto: |
-- |
|
Marc: |
LEADER 03024naa a2200205 a 4500
001 1874908
005 2011-02-22
008 2010 bl uuuu u00u1 u #d
100 1 $aSANTOS JUNIOR, A. G.
245 $aAvaliação de diferentes métodos de purificação da proteína bm86-cg expressa em pichia pastoris.
260 $c2010
300 $a1 p.
520 $aA proteína Bm86-CG é um imunógeno utilizado para imunização de bovinos contra o carrapato Rhipicephalus microplus. Na EMBRAPA Gado de Corte, seu gene foi isolado e clonado em plasmídeo pPIC9, um vetor para expressão heteróloga em Pichia pastoris. O objetivo deste trabalho foi de otimizar métodos de precipitação desta proteína recombinante a partir do sobrenadante da cultura, para melhorar a eficiência na sua obtenção. Duas colônias isoladas de clones GS115-BMCG, uma Mut+ e outro Muts, foram repicadas em meio de cultura com glicerol (BMGY) para seu crescimento e induzidas em meio com metanol (BMMY), seguindo-se o protocolo do manual Easy Pichia Selecti (Invitrogen). Após 96 h, o cultivo foi centrifugado 5 mins a 3.300g e o sobrenadante foi tratado com 1 mM de PMSF e congelado a -200C até sua utilização. Amostras de 10mL do sobrenadante foram precipitadas com acetona (17%, 33% e 67%) e metanol (25%, 35% e 55%). Para a precipitação com sulfato de amônia foi seguido a tabela de precipitação descrita em Proteia Purificativo Handbook (GE Healthcare). Os sobrenadantes foram adicionados de acetona, metanol e sulfato de amônia, homogenizados e mantidos a 4°C. Após 1h, centrifugados por 5 mins a 3.300g. O precipitado foi solubilizado em 400?l de solução tampão fosfatada com PMSF 1 mM, e mantidos a -20°C até sua utilização. As amostras foram incubadas com tampão desnaturante de proteína a 50°C por 8 minutos e logo após aplicadas em gel de poliacrilamida e submetidas a eletroforese a 30mA por 1,5 h. Os géis foram corados com azul de coomassie, fotodocumentados e as imagens foram analisadas no programa TotalLab, por densitometria. As precipitações com metanol originaram bandas visivelmente mais definidas e com maior quantidade da proteína recombinante quando comparada com as precipitações com acetona. Quanto ao sulfato de amônia, observou-se uma curva de precipitação com pico entre as concentrações de 60% e 70%. As concentrações máximas obtidas neste estudo foram com o metanol, chegando a 32,5 mg L-1 para Muts e 64 mg L-1 para Mut+. Os diferentes protocolos utilizados foram eficientes para precipitar a proteína estudada. Entretanto, observou-se que há necessidade de identificar a melhor concentração do agente para otimizar o processo.
650 $aProteína
653 $aBm86-CG
653 $aPrecipitação
700 1 $aCUNHA, R. C.
700 1 $aANDREOTTI, R.
700 1 $aLEITE, F. P. L.
773 $tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE PARASITOLOGIA VETERINÁRIA, 16., 2010, Campo Grande, MS. [Anais...]. Campo Grande, MS: Colégio Brasileiro de Parasitologia Veterinária, 2010. 1 CD-ROM.
Download
Esconder MarcMostrar Marc Completo |
|
Registro original: |
Embrapa Gado de Corte (CNPGC) |
|
|
Biblioteca |
ID |
Origem |
Tipo/Formato |
Classificação |
Cutter |
Registro |
Volume |
Status |
URL |
Voltar
|
|
|
| Registros recuperados : 10 | |
| 1. |  | GARLICH, N.; NACHTIGAL, G. de F.; SCHIEDECK, G.; LIMA, D. L. de; ALTENHOFEN, T. S. Avaliação de substâncias alelopáticas de chinchilho (Tagestes minuta L.) usando o método do sanduíche. In: ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E PÓS GRADUAÇÃO DA EMBRAPA CLIMA TEMPERADO, 3., 2010, Pelotas. resumos e palestras... Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2010. Anais: Carreira, ética e inovação: o que você está fazendo? Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2010. Editado por Ivan Rodrigues de Almeida, Leonardo Ferreira Dutra e Jamir Luis Silva da Silva. 1 CD-ROM.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
|    |
| 3. | | GIACOMINI, G.; NACHTIGAL, G. de F.; LIMA, D. L. de; GIACOMINI, R. Avaliação do potencial antifúngico de óleo essencial de manjericão. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE DEFENSIVOS AGRÍCOLAS NATURAIS, 7., 2015, Pelotas. Anais... Pelotas: Embrapa Clima Temperado, Brasília, DF: Embrapa, 2015. 1 CD-ROM.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| 4. | | GARLICH, N.; NACHTIGAL, G. de F.; SCHIEDECK, G.; LIMA, D. L. de; SILVEIRA, E. F. da; ALTENHOFEN, T. S. Avaliação da atividade alelopática de liteira de folhas de chinchilho. In: CONGRESSO SUL-RIOGRANDENSE DE BIOCIÊNCIAS, 5., 2010, Pelotas. Anais... Pelotas: UCPel, 2010.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| 6. | | NACHTIGAL, G. de F.; SANTOS, F. I. de C. dos; LIMA, D. L. de; SCHIEDECK, G.; MEDEIROS, C. A. B. Implantação de sistema da qualidade segundo Norma NBR ISO/IEC 17025 na Biofábrica da Embrapa Clima Temperado. In: ENCONTRO NACIONAL SOBRE METODOLOGIAS E GESTÃO DE LABORATÓRIOS DA EMBRAPA, 15.; SIMPÓSIO SOBRE METODOLOGIAS DE LABORATÓRIO DE PESQUISA AGROPECUÁRIA, 2., Pelotas, 2010. A Pesquisa Agropecuária como instrumento para a competividade e o desenvolvimento sustentável: resumos... Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2010. Editado por Denilson Gouvea Anthonisen, Rosa Lia Barbieri, Glaucia de Figueiredo Nachtigal. 1 CD-ROM.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| 7. | | LOURENÇO, Y. S.; ZIBETTI, V. K.; LIMA, D. L. de; GIACOMINI, G.; SCHIEDECK, G.; NACHTIGAL, G. de F. Efeito de vermiwash na supressão do fungo de solo Sclerotium rolfsii. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE DEFENSIVOS AGRÍCOLAS NATURAIS, 7., 2015, Pelotas. Anais... Pelotas: Embrapa Clima Temperado, Brasília, DF: Embrapa, 2015. 1 CD-ROM.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| 8. | | SANTOS, F. I. de C. dos; NACHTIGAL, G. de F.; GARLICH, N.; ALTENHOFEN, T. S.; LIMA, D. L. de. Prospecção de inimigos naturais de plantas espontâneas. In: ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E PÓS GRADUAÇÃO DA EMBRAPA CLIMA TEMPERADO, 3., 2010, Pelotas. resumos e palestras... Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2010. Anais: Carreira, ética e inovação: o que você está fazendo? Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2010. Editado por Ivan Rodrigues de Almeida, Leonardo Ferreira Dutra e Jamir Luis Silva da Silva. 1 CD-ROM.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| 9. | | MACHADO, J. J.; LOURENÇO, Y. dos S.; GIACOMINI, G. X.; LIMA, D. L. de; WOLFF, L. F.; NACHTIGAL, G. de F. Efeito inibitório de extrato de própolis sobre Colletotrichum gloeosporioides. In: ENCONTRO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA E PÓS-GRADUAÇÃO DA EMBRAPA CLIMA TEMPERADO, 6., 2016, Pelotas. Ciência: Empreendedorismo e inovação: anais. Brasília, DF: Embrapa, 2016. p. 142-| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| 10. | | RODRIGUEZ, D. P.; GIACOMINI, G. X.; LOURENÇO, Y. S.; NACHTIGAL, G. de F.; SCHWENGBER, J. E.; SCHIEDECK, G.; SILVEIRA, C. A. P.; LIMA, D. L. de. Efeito da estratégia de compostagem laminar e da associação de cultivos sobre a microbiota geral residente no solo. Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2018. 8 p. (Embrapa Clima Temperado. Comunicado Técnico, 361).| Tipo: Comunicado Técnico/Recomendações Técnicas |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
| |
| Registros recuperados : 10 | |
|
| Nenhum registro encontrado para a expressão de busca informada. |
|
|
