Data/hora: 06/06/2024 01:11:31

Biblioteca(s): | Embrapa Gado de Corte.
Data corrente: | 06/02/2018
Data da última atualização: | 06/02/2018
Autoria: | GONÇALVES, A. N. D.
Afiliação: | Aline Najara Domingos Gonçalves.
Título: | Desenvolvimento de um ensaio imunoenzimático (ELISA) pra diagnóstico de Linfadenite caseosa em ovinos e caprinos.
Ano de publicação: | 2017
Fonte/Imprenta: | Campo Grande, MS: Programa de Pós-graduação em ciência Animal/Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, 2017.
Páginas: | 67 f.
Idioma: | Português
Notas: | Tese apresentada à Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, como requisito à obtenção do título de Doutora em Ciência Animal. Área de concentração: Saúde Animal. Orientadora: Grácia Maria Soares Rosinha - Embrapa Gado de Corte
Conteúdo: | A Linfadenite Caseosa (LC) é uma doença infectocontagiosa, causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis e que acomete ovinos e caprinos. Esta doença é caracterizada por lesões purulentas e caseosas nos gânglios linfáticos e, ocasionalmente, pulmões, baço, rins e fígado. O diagnóstico da LC, normalmente, é baseado em sinais clínicos, no entanto, o teste padrão ouro é o isolamento microbiológico, realizado a partir do material purulento dos abcessos. Faz-se necessário um método que seja capaz de diagnosticar animais doentes, com presença ou não de abcessos externos. Neste contexto, visto os esforços para identificar e controlar a doença, objetivou-se, neste estudo, avaliar o potencial da proteína XA1 recombinante (XA1r) de C. pseudotuberculosis como candidata a compor um teste sorológico do tipo ELISA indireto, para o diagnóstico de linfadenite caseosa em ovinos e caprinos. A sequência do gene xa1, que codifica a porção hidrofílica da proteína XA1, foi selecionada com o auxílio do programa Protean (DNASTAR®). Esta sequência e a construção do plasmídeo de expressão gênica foram sinteticamente confeccionadas pela empresa de biotecnologia Genone Biotechnologies. O gene xa1 foi clonado em plasmídeo de expressão em procariotos pET-47b(+). O plasmídeo pet47Bxa1 foi introduzido em célula quimicamente competente de E. coli Rosetta-Gami e realizada a expressão gênica XA1r foi purificada por cromatografia de afinidade, em resina metálica com a coluna de agarose níquel, dialisada em PBS, quantificada pelo método de Lowry e armazenada a -20ºC. Posteriormente, um teste de ELISA indireto foi padronizado com o uso desta proteína como antígeno sistemático (n= 23), assintomáticos (n= 10) e histórico de LC (n= 10). O banco formado com soros de caprinos foi composto por soros positivos (n=29), negativos (n=19), soros de animais de um rebanho com histórico de LC (n= 15) e outros soros de caprinos com sinais clínicos da doença (n= 29), totalizando 92 soros. O ponto de corte foi feito por meio da curva ROC. O teste de ELISA indireto foi capaz de discriminar animais positivos e negativos, com sensibilidade de 90,9% e especificidade de 72,2%. Foram identificados cinco animais como falso-positivos e três foram considerados falso-negativos. Quando testados os animais dos três grupos - testes assintomáticos, histórico de LC e controle sistemático -, 90,7% foi considerado positivo para LC. O teste de ELISA indireto para diagnóstico de LC em caprinos apresentou sensibilidade de 96,6% e especificidade de 67,2%. O teste de ELISA apresentou um animal falso-negativo e seis falso-positivos. A associação do teste de ELISA indireto, proposto a exames clínicos, foi capaz de diagnosticar como positivos 96,55% dos animais que possuíam sinal clínico da doença, mostrando assim, o potencial da proteína XA1r no reconhecimento de anticorpos contra C. pseudotuberculosis. Os resultados demonstram a potencialidade da proteína XA1r, quando utilizada como antígeno em teste ELISA indireto. Deste modo, este imunoensaio poderá ser utilizado para o diagnóstico de ovinos e caprinos com LC, auxiliando no controle da doença.
Palavras-Chave: | Lymphadenitis Caseosa.
Thesagro: | Corynebacterium Pseudotuberculosis.
Thesaurus Nal: | Enzyme-linked immunosorbent assay; Goats; Sheep.
Categoria do assunto: | --
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/172260/1/Desenvolvimento-de-um-ensaio-imunoenzimatico-Elisa.pdf
Registro original: | Embrapa Gado de Corte (CNPGC)
Exemplares: | CNPGC - (17029-1) - UPA - TS - DD -  -  -  - DIS