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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Soja. |
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Data corrente: |
22/09/2010 |
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Data da última atualização: |
18/04/2011 |
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Autoria: |
SANTOS, M. C. dos. |
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Afiliação: |
MICHELLE CRISTINA DOS SANTOS, UNESP Araraquara, doutoranda. |
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Título: |
Estudos bioquímicos de tegumento de soja brasileira: isolamento, purificação e caracterização de peroxidase com guaiacol como substrato. |
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Ano de publicação: |
2010 |
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Fonte/Imprenta: |
2010. |
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Páginas: |
111 f. |
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Idioma: |
Português |
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Notas: |
Tese (Doutorado em Biotecnologia) - UNESP, Araraquara. |
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Conteúdo: |
As peroxidases são hemeproteínas que catalisam a oxidação de vários xenobióticos na presença de peróxido. A soja é um dos principais produtos de exportação do Brasil e sua manufatura gera subprodutos em grande escala. Um destes, a casca, é
uma fonte rica em peroxidase (SBP). Para a otimização da extração da SBP de casca de soja, e condições de ensaio, foi utilizado um planejamento fatorial com metodologia de superfície de resposta, resultando em 128 experimentos. Os dados definiram o meio reacional da SBP: pH 4,5 (transgênicas) e pH 7,0 (tradicionais); temperatura 50°C; tratamento do tegumento com obtenção do pó cetonico; NaCI 0,1 moI/L; volume de amostra da enzima 330uL, guaiacol 30m moI/L, H202 46 mmol/L, em tampão 50mmol/L. Após, iniciou-se os estudos da SBP de diferentes cultivares: convencionais (BRS 258, BRS 260, BRS 262) e transgênicas (BRS 255 RR, BRS Charrua RR e BRS Pampa RR) de cascas de soja fornecidas pela EMBRAPA, visando estudo comparativo sobre o conteúdo de peroxidase (SBP), e posterior seleção para isolamento da enzima e estudos de seus parâmetros cinéticos. Para isso, a amostra, em pó cetônico, de cada cultivar foi ressuspensa em tampão extrator, a proteína precipitada com sulfato de amônio 70%, o precipitado ressuspenso em tampão extrato r e eluído em coluna Sephadex G-25, para dessanilização. Nas frações (eluatos) foram realizados os spots test para identificação de SBP. As cultivares BRS 258, BRS 262, BRS 260 e BRS 255 RR foram selecionadas com maior conteúdo de enzima SBP. Assim, volumes (5mL) de tais cultivares foram eluídos em coluna Sephadex G-100 para purificação parcial e determinação da massa molecular. Com as frações (eluatos) obteve-se "pool" de enzima, onde se efetuou os estudos cinéticos: efeito de cátions mono e divalentes, determinação dos parâmetros cinéticos - kM, Vmax, pH ótimo, temperatura ótima. Os dados mostraram; i) pH ótimo 4,5; ii) temperatura ótima, BRS 260 e BRS 262 80°C, BRS 255 RR isoenzimas com 50°C e 70°C, BRS 258 70°C; iii) constante kM, BRS 2601,51 e 1,26 mmol/L, BRS 255 RR 224,0 mmol/L, BRS 2581,91, BRS 262 3,0 e
1,61 mmol/L; iv) constante vmax, BRS 260 0,038 e 0,067umol/min; BRS 255 RR O, 186umol/min; BRS 258 0,042umol/min; BRS 262 0,043 e 0,045umol/min, v) massa molecular, BRS 260118,76 e 297,91kDa; BRS 255 RR 182,35 e 128 kDa; BRS 262 79,04 e 72,17 kDa; BRS 258 78,32 e 63,53 kDa. Estudos com extrato bruto de SBP(pó cetônico), com todas cultivares, verificando a estabilidade da enzima durante estocagem no freezer, mostraram: i) BRS 255 RR, estável 160 dias, e perda de atividade a partir de 1 ano; ii) BRS 258, estável até 30 dias; iii) BRS CHARRUA estável até 118 dias; iv) BRS PAMPA RR, estável até 84 dias; v) BRS 260 estável até 1 ano; vi) BRS 262 estável até 1 ano. MenosAs peroxidases são hemeproteínas que catalisam a oxidação de vários xenobióticos na presença de peróxido. A soja é um dos principais produtos de exportação do Brasil e sua manufatura gera subprodutos em grande escala. Um destes, a casca, é
uma fonte rica em peroxidase (SBP). Para a otimização da extração da SBP de casca de soja, e condições de ensaio, foi utilizado um planejamento fatorial com metodologia de superfície de resposta, resultando em 128 experimentos. Os dados definiram o meio reacional da SBP: pH 4,5 (transgênicas) e pH 7,0 (tradicionais); temperatura 50°C; tratamento do tegumento com obtenção do pó cetonico; NaCI 0,1 moI/L; volume de amostra da enzima 330uL, guaiacol 30m moI/L, H202 46 mmol/L, em tampão 50mmol/L. Após, iniciou-se os estudos da SBP de diferentes cultivares: convencionais (BRS 258, BRS 260, BRS 262) e transgênicas (BRS 255 RR, BRS Charrua RR e BRS Pampa RR) de cascas de soja fornecidas pela EMBRAPA, visando estudo comparativo sobre o conteúdo de peroxidase (SBP), e posterior seleção para isolamento da enzima e estudos de seus parâmetros cinéticos. Para isso, a amostra, em pó cetônico, de cada cultivar foi ressuspensa em tampão extrator, a proteína precipitada com sulfato de amônio 70%, o precipitado ressuspenso em tampão extrato r e eluído em coluna Sephadex G-25, para dessanilização. Nas frações (eluatos) foram realizados os spots test para identificação de SBP. As cultivares BRS 258, BRS 262, BRS 260 e BRS 255 RR foram selecionadas com maior c... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Soja - semente - bioquímica. |
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Categoria do assunto: |
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Marc: |
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653 $aSoja - semente - bioquímica
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