Data/hora: 11/06/2024 13:18:36

Biblioteca(s): | Embrapa Milho e Sorgo.
Data corrente: | 25/11/2019
Data da última atualização: | 29/11/2019
Autoria: | COSTA, J. F. da V.; LOPES, S. da S.; BARROS, B. de A.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de.
Afiliação: | Jéssica Fabiane da Veiga Costa, Centro Universitário de Sete Lagoas; Simara da Silva Lopes, Universidade Federal de São João del-Rei; BEATRIZ DE ALMEIDA BARROS, CNPMS; ANDREA ALMEIDA CARNEIRO, CNPMS; SYLVIA MORAIS DE SOUSA TINOCO, CNPMS.
Título: | Determinação do número de inserções de transgene em plantas transgênicas de tabaco por reação da cadeia da polimerase em tempo real.
Ano de publicação: | 2019
Fonte/Imprenta: | Cadernos Saberes, Sete Lagoas, n. 5, p. 208-229, 2019.
Idioma: | Português
Conteúdo: | Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode in&#64258;uenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modi&#64257;cadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto não foi con&#64257;rmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia com PCR em tempo real (qPCR) para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando o gene Axi1 como controle endógeno. Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens e regeneradas com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para con&#64257;rmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de tabaco transgênico T0 fora avaliados com o método 2-&#916;Ct para determinar o número relativo de cópias do gene Bar no genoma, utilizando Axi1 como gene de referência. Uma amostra com uma cópia (ZmPstol8.02 Ev.6) foi estabelecida pelo metódo 2-&#916;Ct e utilizada como referência de cópia única usando o método 2-&#916;&#916;Ct. Os resultados da determinação do número de cópias foram concordantes com as taxas de segregação em plantas T1 com o genótipo Bar de cada evento. Todos os três eventos cópia únicas tiveram segregação Mendeliana de 3:1 e esses resultados con&#64257;rmam que Axi1 é um gene cópia única e pode ser usado como um controle endógeno para avaliar o número de cópias com o método 2-&#916;&#916;Ct em tabaco transgênico.
Palavras-Chave: | Axi1; Transgênico.
Thesagro: | Fósforo; Nicotiana Tabacum.
Categoria do assunto: | S Ciências Biológicas
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/205375/1/Determinacao-numero.pdf
Registro original: | Embrapa Milho e Sorgo (CNPMS)
Exemplares: | CNPMS - (29024-1) - UPC - AP - DD -  -  -  - DIS