Data/hora: 07/06/2024 18:32:13

Biblioteca(s): 	Embrapa Agrobiologia.	
Data corrente: 	03/07/2006	
Data da última atualização: 	17/11/2015	
Autoria: 	WERNECK, J. O. S.	
Título: 	Caracterização da estirpe S93 de Bacillus thuringiensis Subsp. Kurstaki efetiva contra a lagarta-do-cartucho do milho (Spodoptera frugiperda).	
Ano de publicação: 	1997	
Fonte/Imprenta: 	1997. 163 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular) - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Brasília, Brasília, DF.	
Idioma: 	Português	
Conteúdo: 	O presente trabalho teve como objetivo caracterizar a estirpe S93 de Bacil/us
Ihuringiensis subsp. kurstaki, através de técnicas moleculares, e avaliar a toxicidade da
mesma para a lagarta-do-cartucho do milho (Spodoptera frugiperda, lE. Smith, 1797,
Lepidoptera: Nocutuidae). Obteve-se, através de bioensaios com larvas de 3° estádio de S. frugiperda, uma CL50 6,7 vezes menor, em média, para a estirpe S93 do que a CL50 para a estirpe HD-l,  padrão de Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki. Foram identificados, através de PCR (reação em cadeia da polimerase) e análises  do padrão de restrição e de "Southem blot", os genes cry1Aa, crylAb, cry1Ac e cry2A no DNA plasmidial da estirpe S93. Os genes tipo crylA foram localizados em um plasmídeo de aproximadamente 44 MDa.  Através de microscopia eletrônica de varredura, verificou-se que a estirpe S93
produz grande quantidade de cristais bipiramidais e cubóides, similares aos produzidos pela  estirpe HD-l. As misturas esporos-cristais, analisadas através de eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS e "Westem blot", contém 2 polipeptídeos principais de 130 e 65 kDa, os quais correspondem às toxinas Cry 1 e Cry2, que apresentam atividade contra lepidópteros e lepidópteros e dípteros, respectivamente.  Um gene crylAb, selecionado em um banco genômico construído com o DNA  plasmidial da estirpe S93 em vetor Lambda-DASH rI, e analisado através de PCR, perfil de restrição e "Southern blot", foi subclonado no plasmídeo vetor pUC 18 e parcialmente seqüenciado (extremidades 5'e 3'). Este gene mostrou 99% de homologia de seqüência de nucleotídios da extremidade 5' com esta região do gene cry1 Ab5 de B. thuringiensis berliner 1715. Os aminoácidos deduzidos a partir das seqüências do gene clonado mostraram elevada identidade com aminoácidos das proteínas CrylAa1 (98%), CrylAb5 (99%) e CrylAcl (99%) na região N-terminal. A identidade de aminoácidos foi de 97,5 % com CrylAb5 e 86,5% com CrylAal e CrylAcl na região C-terminal.
The aim of this work was to characterize the Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki
strain S93, using molecular tecniques, and to evaluate its toxicity to the fall armyworm
(Spodopterafrugiperda, lE. Smith, 1797, Lepidoptera: Nocutuidae). The LCso of the S93 strain for third instar larvae of  S. frugiperdu was 6.7 times lower than the LC50 of the standard HD-l strain of B. thuringiensis subsp. kurstaki. Through PCR (polimerase chain reaction), restriction enzyme pattern and Southern blot analysis, the crylAa, crylAb, cry lAc e cry2A genes were identified in the plasmid DNA of the S93 strain. cry lA-type genes were localized in a plasmid of around 44 MDa. Scanning electron microscopy observations showed that S93 strain contains a large amount of bipyramidal and cuboidal crystals, similar to those produced by the HD-I strain. The spore-crystal mixtures, analysed through SDS-P AGE, showed 2 major polypeptides of 130 and 65 kDa, corresponding to the Cry 1 and Cry2 toxins, which have activity against lepidopteran and both lepidopteran and dipteran larvae, respectively. The Western blot analysis showed that these proteins are immunologically similar to the CrylA protein. A cry I A b gene was isolated through the screening of a genomic library constructed with the plasmid DNA of the S93 strain in Lambda-DASH II vector, This gene was subcloned in the pUC18 plasmid and partialy sequenced (5'and 3'ends), This gene showed 99% nucleotide sequence identity in the 5'end with the crylAb5 gene of B. thuringiensis berliner 1715. The deduced aminoacids from the cloned gene sequences showed high identity with the aminoacids from the Cry1Aa1 (98%), Cry1Ab5 (99%) and CrylAc1 (99%) proteins at the N-terminal half. At the C-terminal half, the aminoacid identity was 97,5 % with the CrylAb5 and 86.5% with Cry1Aa1 and Cry1Ac1 proteins.	
Palavras-Chave: 	Lagarta do cartucho; Maize.	
Thesagro: 	Bacillus Thuringiensis; Milho; Spodoptera Frugiperda.	
Categoria do assunto: 	--	
Registro original: 	Embrapa Agrobiologia (CNPAB)	
Exemplares: 	CNPAB - (33304-1) - ADD - TS - -- - 2006.00002 -  - 2006.00002 - DIS