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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Milho e Sorgo. |
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Data corrente: |
09/10/2018 |
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Data da última atualização: |
12/02/2019 |
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Tipo da produção científica: |
Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento |
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Autoria: |
COSTA, J. F. da V.; LOPES, S. da S.; BARROS, B. de A.; CARNEIRO, A. A.; SOUSA, S. M. de. |
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Afiliação: |
Jéssica Fabiane da Veiga Costa, Centro Universitário de Sete Lagoas - UNIFEMM; Simara da Silva Lopes, Universidade Federal de São João de Rei; BEATRIZ DE ALMEIDA BARROS, CNPMS; ANDREA ALMEIDA CARNEIRO, CNPMS; SYLVIA MORAIS DE SOUSA TINOCO, CNPMS. |
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Título: |
Determinação do número de cópias de transgenes em eventos de tabaco por PCR em tempo real. |
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Ano de publicação: |
2018 |
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Fonte/Imprenta: |
Sete Lagoas: Embrapa Milho e Sorgo, 2018. |
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Páginas: |
23 p. |
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Série: |
(Embrapa Milho e Sorgo. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 168). |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
Por causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765) sob o promotor da ubiquitina e com o gene de seleção Bar. Para confirmar o número de cópias do gene Axi1, um fragmento desse gene de tabaco foi clonado no vetor pGEM-T Easy e utilizado na confeccção de uma curva padrão. O número de cópias do gene foi obtido plotando-se valores de Ct obtidos de amostras de DNA genômico de tabaco de concentração conhecida nessa curva. Essa abordagem demonstrou que o gene Axi1 encontra-se em cópia única no genoma do tabaco. Assim, onze eventos de tabaco transgênico T0 fora avaliados com o método 2-?Ct para determinar o número relativo de cópias do gene Bar no genoma, utilizando Axi1 como gene de referência. Uma amostra com uma cópia (ZmPstol8.02 Ev.6) foi estabelecida pelo metódo 2-?Ct e utilizada como referência de cópia única usando o método 2-??Ct. Os resultados da determinação do número de cópias foram concordantes com as taxas de segregação em plantas T1 com o genótipo Bar de cada evento. Todos os três eventos cópia únicas tiveram segregação Mendeliana de 3:1 e esses resultados confirmam que Axi1 é um gene cópia única e pode ser usado como um controle endógeno para avaliar o número de cópias com o método 2-??Ct em tabaco transgênico. MenosPor causa da facilidade de regeneração in vitro e de transformação via agrobactéria, o tabaco tem sido considerado um sistema modelo ideal para a transferência de genes e estudos genético-moleculares. Métodos eficientes para caracterizar plantas transgênicas são importantes para entender o estado fisiológico do transformante. A técnica de PCR em tempo real pode ser usada para determinar a zigosidade em plantas transgênicas e o número de cópias do transgene. Em plantas transgênicas, o número de cópias do transgene pode influenciar o nível de expressão e a estabilidade genética do gene alvo, o que torna a estimativa do número de cópias do transgene extremamente importante na pesquisa com culturas geneticamente modificadas. O gene Axi1, envolvido na ação das auxinas, já foi utilizado anteriormente como controle endógeno na determinação de número de inserções de trangenes de tabaco, no entanto, não foi confirmado se esse gene é cópia única. Portanto, o objetivo desse trabalho foi estabelecer uma metodologia para determinar o número de cópias em plantas transgênicas de tabaco, utilizando PCR em tempo real (qPCR). Plantas de tabaco (Petit havana) foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens EHA101 e regeneradas de calos selecionados em meio de brotamento e enraizamento com vetor vazio (pMCG1005), com o gene de arroz Phosphorus Starvation Tolerance 1 (OsPstol1) e seus homólogos em milho (ZmPstol3.06, ZmPstol8.02 e ZmPstol8.05_1) e sorgo (Sb07g002840, Sb03g031690 e Sb03g006765)... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Transgênico. |
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Thesagro: |
Engenharia Genética; Planta Transgênica. |
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Categoria do assunto: |
G Melhoramento Genético |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/184128/1/bol-168.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Milho e Sorgo (CNPMS) |
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Biblioteca |
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Registro |
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| Registros recuperados : 202 | |
| 44. |  | NEGRI, B.; AZEVEDO, G.; MATOS, F.; GUIMARAES, C. T.; SOUSA, S. M. de. Root traits analysis of recombinant inbred lines underlying phosphorus acquisition efficiency in maize. In: ANNUAL MAIZE GENETICS CONFERENCE, 54., 2011, Portland, Oregon. Program and abstracts... Portland: [s.n.], 2012. p. 159.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 47. | | NEGRI, B. F.; AZEVEDO, G. C.; MATOS, F. M.; MAGALHAES, K. S.; GUIMARAES, C. T.; SOUSA, S. M. de. Análise de linhagens recombinantes endogâmicas de milho visando à relação entre a eficiência da aquisição de fósforo e a morfologia do sistema radicular. In: CONGRESSO NACIONAL DE MILHO E SORGO, 29., 2012, Águas de Lindóia. Diversidade e inovações na era dos transgênicos: resumos expandidos. Campinas: Instituto Agronômico; Sete Lagoas: Associação Brasileira de Milho e Sorgo, 2012. p. 168-175. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 48. | | SOUSA, S. M. de; PARENTONI, S. N.; GUIMARAES, C. T.; MAGALHAES, J. V. de; VASCONCELOS, M. J. V. de. Análise da morfologia do sistema radicular e da expressão de genes visando a associação com a eficiência na aquisição de fósforo em milho. In: CONGRESSO NACIONAL DE MILHO E SORGO, 28.; SIMPÓSIO BRASILEIRO SOBRE A LAGARTA DO CARTUCHO, 4., 2010, Goiânia. Potencialidades, desafios e sustentabilidade: resumos expandidos... Sete Lagoas: ABMS, 2010. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 49. | | NEGRI, B. F.; HUFNAGEL, B. M.; PASTINA, M. M.; MAGALHAES, J. V. de; SOUSA, S. M. de. Avaliação das características morfológicas do sistema radicular de linhagens recombinantes endogâmicas de sorgo em solução nutritiva sob estresse de fósforo. In: CONGRESSO NACIONAL DE MILHO E SORGO, 30.; SIMPÓSIO SOBRE LEPDÓPTEROS COMUNS A MILHO, SOJA E ALGODÃO, 1., 2014, Salvador. Eficiência nas cadeias produtivas e o abastecimento global: resumos expandidos. Sete Lagoas: Associação Brasileira de Milho e Sorgo, 2014. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 50. | | FRANCO, A. L.; PEREIRA, L. de M.; SOUSA, S. M. de; SOUZA, G.; CARVALHO, M. A.; SIMON, M. F. Baixa diversificação citomolecular no gênero Stylosanthes Sw. (Papilionoideae, Leguminosae). Genética e Biologia Molecular, v. 43, n. 1, 2020.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
| Biblioteca(s): Embrapa Cerrados. |
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| 52. | | SOUSA, S. M. de; PARENTONI, S. N.; GUIMARAES, C. T.; MAGALHAES, J. V. de; VASCONCELOS, M. J. V. de. Influence of phosphorus and sucrose in root morphology, biochemistry and physiology. In: ANNUAL MAIZE GENETICS CONFERENCE, 52., 2010, Riva del Garda, Italy. Program and abstracts... Riva del Garda: [s.n.], 2010. p. 50.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 54. | | AZEVEDO, G. C.; NEGRI, B. F.; MATOS, F. M.; SOUSA, S. M. de; MAGALHAES, J. V. de; GUIMARAES, C. T. Identificação de genes homólogos ao Pup1 e mapeamento de QTLs associados com morfologia radicular em milho (Zea mays). In: CONGRESSO NACIONAL DE MILHO E SORGO, 29., 2012, Águas de Lindóia. Diversidade e inovações na era dos transgênicos: resumos expandidos. Campinas: Instituto Agronômico; Sete Lagoas: Associação Brasileira de Milho e Sorgo, 2012. p. 2873-2879. 1 CD-ROM.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 55. | | OLIVEIRA, N. T. de; NODA, R. W.; LANA, U. G. de P.; ZANDONADI, D. B.; SOUSA, S. M. de. Humic substances regulate auxin-related genes and plasma membrane h+-ATPase activity during maize root development. In: SIMPÓSIO LATINO-AMERICANO SOBRE BIOESTIMULANTES NA AGRICULTURA, 2.; REUNIÃO BRASILEIRA SOBRE INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA EM PLANTAS E PATÓGENOS, 9., 2018, Florianópolis. Anais. Florianópolis: Universidade Federal de Santa Catarina, 2018. p. 170.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 58. | | GONÇALVES, A. B. da S.; GOMES, E. A.; LANA, U. G. de P.; SOUSA, S. M. de; GUIMARAES, C. T. Estabelecimento de metodologia para análise e quantificação da colonização por fungo micorrízico arbuscular em milho. In: CONGRESSO NACIONAL DE MILHO E SORGO, 31., 2016, Bento Gonçalves. Milho e sorgo: inovações, mercados e segurança alimentar: anais. Sete Lagoas: Associação Brasileira de Milho e Sorgo, 2016.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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| 60. | | NEGRI, B. F.; AZEVEDO, G. C.; LANA, U. G. P.; BARROS, B. A.; GUIMARAES, C. T.; SOUSA, S. M. de. Spatial and temporal gene expression of ZmPSTOL1 genes in maize. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 60., 2014, Guarujá. Resumos. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 2014. p. 69.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo. |
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