Data/hora: 06/06/2024 13:26:05

Biblioteca(s): | Embrapa Rondônia.
Data corrente: | 15/10/2009
Data da última atualização: | 27/09/2022
Autoria: | BRITO, L. G.; OLIVEIRA, M. C. de S.; MOURA, M. M. da F.; SILVA NETTO, F. G. da S.; CAVALCANTE, F. A.; MARIM, A. D.; SOUZA, G. C. R. de; SILVA, J. L. da.
Afiliação: | Luciana Gatto Brito, Embrapa Rondônia; Márcia Cristina de Sena Oliveira, Embrapa Pecuária Sudeste; Maria Manuela da Fonseca Moura, UNIR; Francelino Goulart da Silva Netto, Embrapa Rondônia; Francisco Aloísio Cavalcante, Embrapa Acre; Adriana Denise Marim.
Título: | Extração de DNA a partir de coágulos sanguíneos bovinos.
Ano de publicação: | 2006
Fonte/Imprenta: | Porto Velho: Embrapa Rondônia, 2006.
Páginas: | 17 p.
Série: | (Embrapa Rondônia. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 43).
Idioma: | Português
Conteúdo: | Foi otimizada uma metodologia de extração de DNA genômico a partir de coágulo sanguíneo. Amostras de sangue com e sem anticoagulante EDTA para a obtenção dos coágulos sanguíneos foram coletadas em bovinos nos estados de Rondônia e Acre para pesquisa de Anaplasma marginale. Para a extração de DNA a partir do coágulo sanguíneo testaram-se dois tipos de tecido de nylon: no tratamento 1, o tecido utilizado apresentava diâmetro dos poros de 200 µm e no tratamento 2, tecido com poros de diâmetro de 1.200 µm. As amostras de sangue com anticoagulante representaram o tratamento 3, sendo este considerado como tratamento controle. Após a quebra mecânica, os coágulos sofreram centrifugação a 7.000 RPM por 15 minutos passando através das malhas dos tecidos utilizados nos tratamentos 1 e 2. A extração de DNA das amostras a partir do coágulo centrifugado e do sangue total se deu através da utilização de kit comercial para extração de DNA genômico. A quantificação do DNA obtido foi realizada através de espectrofotometria a 260 e 280 m, sendo sua integridade verificada através de eletroforese em gel de agarose. As amostras de DNA obtidas a partir dos diferentes protocolos foram utilizadas como molde para amplificação, por PCR, do gen msp5 de A. marginale. A quantidade de DNA obtida pelos tratamentos 1 e 2 foi semelhante a do sangue total (33,39 ± 1,17; 31,76 ± 0,663; 32,35 ± 0,676, respectivamente). A pureza do DNA nas amostras obtidas a partir dos tratamentos 1 e 2 foram semelhantes a do sangue total (A260/280 = 1,61 ± 0,068; 1,58 ± 0,035; 1,63 ± 0,028, respectivamente). A utilização de tecidos de organza ou tipo filó se mostrou como uma metodologia apta a ser incorporada como método de rotina para extração de DNA a partir de coágulo sanguíneo bovino por ser uma metodologia simples, rápida, barata e reproduzível para a obtenção de quantidades consideráveis de DNA de boa qualidade para utilização em estudos de epidemiologia molecular em patologias bovinas.
Palavras-Chave: | blood clot; bovine diseases; Coágulo sanguíneo; DNA extraction; Doenças de bovinos; Epidemiologia molecular; Extração de DNA.
Thesaurus Nal: | molecular epidemiology.
Categoria do assunto: | --
URL: | http://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/24667/1/bpd43-dnabovinos.pdf
Registro original: | Embrapa Rondônia (CPAF-RO)
Exemplares: | CPAF-RO - (14246-1) - UMT - FL - DD -  -  -  - DIS