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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Pecuária Sudeste. |
Data corrente: |
05/09/2007 |
Data da última atualização: |
10/08/2011 |
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
Autoria: |
PERECIN, F.; YAMAZAKI, W.; FERREIRA, C. R.; MÉO, S. C.; BIASE, F. H.; MERIGHE, G. K. F.; SARAIVA, N. Z.; TETZNER, T. A. D.; MEIRELLES, F. V.; GARCIA, J. M. |
Afiliação: |
Felipe Perecin, FCAV/UNESP, JABOTICABAL, SP.; Walt Yamazaki, FCAV/UNESP, JABOTICABAL, SP.; Christina R. Ferreira, FZEA/USP, PIRASSUNUNGA, SP.; SIMONE CRISTINA MEO, CPPSE. |
Título: |
Efeito do protocolo de sincronização celular na produção de clones bovinos. |
Ano de publicação: |
2007 |
Fonte/Imprenta: |
Acta Scientiae Veterinariae, v. 35, supl. 3, p. s1181, 2007. In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE TECNOLOGIA DE EMBRIÕES, 21., 2007, Salvador. Anais... Salvador: UFRGS, 2007. |
Páginas: |
p. 1267 |
Idioma: |
Português |
Conteúdo: |
Os métodos de sincronização da célula doadora de núcleo para uso em clonagem baseiam-se no bloqueio reverslvel do ciclo celular em pontos especlficos. Idealmente, espera-se que esse bloqueio não provoque prejulzo à viabilidade do embrião reconstituldo após a transferência de núcleo. Este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência do processo de clonagem (taxa de eletrofusão, produção de blastocistos e estabelecimento de prenhez) a partir de dois protocolos de sincronização celular: privação de soro fetal bovino (SFB) ou cultivo celular até confluência. Oócitos bovinos foram recuperados por aspiração folicular postmortem e maturados in vitro (MIV) por 18h em TCM-199 suplementado com 10% de SFB, 1 ug/mL FSH, 50ug/ mL hCG, 1 ug/mL estradiol, 0,2mM piruvato de sódio e 83,4~g/mL amicacina em atmosfera úmida de 5% de CO2 em ar a 38,5°C. Oócitos apresentando extrusão do primeiro corpúsculo polar foram selecionados, corados com 10ug/mL de Hoechst 33342 e enucleados em fluido sintético de oviduto (SOF) tamponado com HEPES, suplementado com 10% de SFB e 7,5ug/mL de citocalasina B. A reconstituição oocitâria foi realizada com dois grupos de fibroblastos bovinos: Grupo A - cultivados sob privação de SFB por 3 a 5 dias (Dulbecco's Modified Eagle Medium -DMEM suplementado com 0,5% de SFB); ou Grupo B -cultivados até confluência (DMEM suplementado com 10% de SFB). Conjuntos citoplasto+fibroblasto foram eletrofundidos em solução de manitol 0,28M, com dois pulsos de corrente direta de 2,OKv/cm e duração de 20s cada. A ativação foi realizada por exposição à ionomicina (5 minutos, 5~M) seguida de incubação em SOF suplementado com 20mM cloreto de estrôncio e .\ O~g/mL de citocalasina B por 6 horas. Os provâveis zigotos foram co-cultivados com células da granulosa em SOF suplementado com 2,5% de SFB e 0,5% de BSA em atmosfera úmida de 5% de CO2 em ar a 38,5°C por 7 dias. Alguns blastocistos de cada grupo foram transferidos para fêmeas receptoras previamente sincronizadas. As taxas de eletrofusão e produção de blastocistos dos dois grupos foram submetidas à ANOVA, com nlvel de significância de 5%. Houve diferença signiticativaentre os grupos A e B quanto às taxas de eletrofusão: 3,66o/a:!:137,% (549 fundido sem 1631 reconstituidos) contra 40,07% % 11,95% (696 fundidos em 1737 reconstituidos), respectivamente; e quanto ao desenvolvimento até blastocisto: 20,58% % 13,84% (113 blastocistos em 549) contra 34,77o/a:!:1 0,47% (242 blastocistos em 696), respectivamente. Tais diferenças proporcionaram produção média de 5,65 e 12,74 blastocistos por sessão de micromanipulação nos grupos A e B, respectivamente. No grupo A não foram diagnosticadas prenhezes aos 30 dias em 25 receptoras inovuladas; no grupo B foram diagnosticadas 4 gestações a partir de II inovulações (36,4%). Embora a privação de SFB permita o desenvolvimento a termo de clones bovinos (Campbell et al., Nature, 380:64, 1996), existem relatos de maior fragmentação de DNA após utilização da privação (Gibbons et aI., Biol Reprod, 66:895, 2002). Ainda, as menores taxas de eletrofusão, produção de blastocistos e estabelecimento de prenhez observadas no grupo A em comparação ao B, indicam que o uso de fibrob'astos submetidos à privação de SFB não é justiticâvel para o procedimento de clonagem em bovinos. MenosOs métodos de sincronização da célula doadora de núcleo para uso em clonagem baseiam-se no bloqueio reverslvel do ciclo celular em pontos especlficos. Idealmente, espera-se que esse bloqueio não provoque prejulzo à viabilidade do embrião reconstituldo após a transferência de núcleo. Este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência do processo de clonagem (taxa de eletrofusão, produção de blastocistos e estabelecimento de prenhez) a partir de dois protocolos de sincronização celular: privação de soro fetal bovino (SFB) ou cultivo celular até confluência. Oócitos bovinos foram recuperados por aspiração folicular postmortem e maturados in vitro (MIV) por 18h em TCM-199 suplementado com 10% de SFB, 1 ug/mL FSH, 50ug/ mL hCG, 1 ug/mL estradiol, 0,2mM piruvato de sódio e 83,4~g/mL amicacina em atmosfera úmida de 5% de CO2 em ar a 38,5°C. Oócitos apresentando extrusão do primeiro corpúsculo polar foram selecionados, corados com 10ug/mL de Hoechst 33342 e enucleados em fluido sintético de oviduto (SOF) tamponado com HEPES, suplementado com 10% de SFB e 7,5ug/mL de citocalasina B. A reconstituição oocitâria foi realizada com dois grupos de fibroblastos bovinos: Grupo A - cultivados sob privação de SFB por 3 a 5 dias (Dulbecco's Modified Eagle Medium -DMEM suplementado com 0,5% de SFB); ou Grupo B -cultivados até confluência (DMEM suplementado com 10% de SFB). Conjuntos citoplasto+fibroblasto foram eletrofundidos em solução de manitol 0,28M, com dois pulsos de corrente direta de 2... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Efeito do protocolo; Produção de clones bovinos; Sincronização celular. |
Categoria do assunto: |
-- |
URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/item/39612/1/POCISCM2007.00170.pdf
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Marc: |
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61. | | TETZNER, T. A. D.; SARAIVA, N. Z.; PERECIN, F.; FERREIRA, C. R.; MÉO, S. C.; OLIVEIRA, C. S.; MELO, D. S.; MONTEIRO, F. M.; VANTINI, R.; GARCIA, J. M. Efeitos da substituição do soro fetal bovino (SFB) e da albumina sérica bovina (BSA) pela ovalbumina (OVA) na produção in vitro de embriões bovinos. Acta Scientiae Veterinariae, v. 35, supl. 3, p. s1181, 2007; In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE TECNOLOGIA DE EMBRIÕES, 21., 2007, Salvador. Anais... Salvador: UFRGS, 2007.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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62. | | NICIURA, S. C. M.; FERREIRA, C. R.; PERECIN, F.; SARAIVA, N. Z.; TETZNER, T. A. D.; BORGES, J. C.; YAMAZAKI, W.; LEAL, C. L. V.; MEIRELLES, F. V.; GARCIA, J. M. Troca de carioplasto entre zigotos ativados com estrôncio ou 6-DMAP. Acta Scientiae Veterinariae, Porto Alegre, v. 35, Supl. 3, 2007. p. s1269. Edição de anais da 21a. Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões, Salvador, 2007.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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63. | | SARAIVA, N. Z.; OLIVEIRA, C. S.; TETZNER, T. A. D.; MELO, D. S.; MONTEIRO, F. M.; LIMA, M. R.; LEAL, C. L. V.; NICIURA, S. C. M.; GARCIA, J. M. Evaluation of MPF and MAPK activities in recipient bovine oocytes produced by chemical enucleation techniques in nuclear transfer. In: INTERNATIONAL SYMPOSIUM ANIMAL BIOLOGY OF REPRODUCTIVE, 3., 2010, Águas de São Pedro: CBRA: USP/FMVZ, 2010Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
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64. | | PERECIN, F.; YAMAZAKI, W.; FERREIRA, C. R.; MÉO, S. C.; BIASE, F. H.; MERIGHE, G. K. F.; SARAIVA, N. Z.; TETZNER, T. A. D.; MEIRELLES, F. V.; GARCIA, J. M. Expressão de DNA metiltransferases em blastocistos bovinos produzidos in vivo e in vitro. Acta Scientiae Veterinariae, v. 35, supl. 3, p. 1181, 2007.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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65. | | PERECIN, F.; YAMAZAKI, W.; FERREIRA, C. R.; MÉO, S. C.; BIASE, F. H.; MERIGHE, G. K. F.; SARAIVA, N. Z.; TETZNER, T. A. D.; MEIRELLES, F. V.; GARCIA, J. M. Efeito do protocolo de sincronização celular na produção de clones bovinos. Acta Scientiae Veterinariae, v. 35, supl. 3, p. s1181, 2007. In: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILEIRA DE TECNOLOGIA DE EMBRIÕES, 21., 2007, Salvador. Anais... Salvador: UFRGS, 2007. p. 1267Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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66. | | MONTEIRO, C. A. S.; SARAIVA, H. F. R. A.; CARMARGO, A. J. R.; ROSA, P. S.; RODRIGUES, A. L. R.; SERAPIÃO, R. V.; NOGUEIRA, L. A. G.; CAMARGO, L. S. de A.; GARCIA, J. M.; OLIVEIRA, C. S. Effect of camp modulalators during oocyte in vitro maturation on gap junctional activity of vitrifief bovine oocytes In: ANNUAL CONFERENCE OF THE INTERNATIONAL EMBRYO TRANSFER SOCIETY, 2016, Louisville. Reproduction, fertility and development: proceedings. Louisville: [s.n.], 2016.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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67. | | MONTEIRO, C. A. S.; LEAL, G. R.; SARAIVA, H. F. R. A.; CAMARGO, A. J. R.; RODRIGUES, A. L. R.; SERAPIÃO, R. V.; NOGUEIRA, L. A. G.; CAMARGO, L. S. de A.; GARCIA, J. M.; OLIVEIRA, C. S. Effect of cAMP modulators during oocyte in vitro maturation on nuclear maturation and cytoskeleton integrity of vitrified bovine oocytes. In: ANNUAM MEETING OF THE BRAZILIAN EMBRYO TECHNOLOGY SOCIETY, 29., 2015, Gramado. Abstracts... Gramado: SBTE, 2015.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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68. | | OLIVEIRA, C. S.; SARAIVA, N. Z.; BARROS, F. F. P. C.; LOPES, F. L.; CAPANHA, B. C. S.; NOGUEIRA, M. F. G.; SERAPIÃO, R. V.; MONTEIRO, F. M.; GARCIA, J. M. Effects of in vitro culture on epigenetic control of bivalent domains (H3K4ME3 e H3K27ME3) and expression of neuronal genes in cortical neurons. In: CONGRESSO BRASILEIRO BRASILEIRO DE GENÉTICA, 59., 2013, Águas de Lindóia. Resumos... Águas de Lindóia: Sociedade Brasileira de Genética, 2013.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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71. | | CHIARATTI, M. R.; FERREIRA, C. R.; MEIRELLES, F. V.; MÉO, S. C.; PERECIN, F.; SMITH, L. C.; FERRAZ, M. L.; SÁ FILHO, M. F. de; GIMENES, L. U.; BARUSELLI, P. S.; GASPARRINI, B.; GARCIA, J. M. Xenooplasmic transfer between buffalo and bovine enables development of homoplasmic offspring. Cellular Reprogramming, v. 12, n. 2, 2010.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
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