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Registro Completo |
Biblioteca(s): |
Embrapa Caprinos e Ovinos. |
Data corrente: |
24/06/2013 |
Data da última atualização: |
27/06/2016 |
Autoria: |
OLIVEIRA, M. M. M.; MELO, M. A. de; ANDRADE, P. P. de; GOMES, S. M.; CAMPOS, A. C. |
Título: |
Western blot para o diagnóstico das infecções pelos lentivírus de pequenos ruminantes em caprinos: um método simples para a produção de antígeno. |
Ano de publicação: |
2013 |
Fonte/Imprenta: |
Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 65, n. 3, p. 694-698, 2013. |
Idioma: |
Português |
Conteúdo: |
Resumo: O sorodiagnóstico das lentiviroses de caprinos e ovinos é realizado principalmente pela imunodifusão em gel de agar (AGID) e/ou ELISA. Embora relativamente simples, esses métodos não identificam os antígenos virais reconhecidos na resposta imune do animal examinado, por isso o western blot (WB) vem ganhando maior relevância como ferramenta de diagnóstico dessas enfermidades. Neste trabalho, o antígeno utilizado no WB foi obtido através de um sistema simplificado de purificação: concentração por diálise do sobrenadante de culturas celulares infectadas, seguido de centrifugação em gradiente contínuo de sacarose. A separação das proteínas virais foi obtida por SDS-PAGE a 10% e a transferência para membranas de nitrocelulose realizada pelo sistema semi-úmido. A revelação das membranas mostrou reconhecimento pelo soro padrão positivo de cinco proteínas, com pesos moleculares de 14-16, 25, 40, 50 e 70 kDa. Todas as 8 amostras de soro caprino, positivas na ADIG, reconheceram pelo menos uma banda proteíca no immunoblot, variando contudo o número de bandas reconhecidas. Reação positiva à glícoproteína 40 (gp 40) foi observada em quatro animais, com intensidade de reação discreta em três deles. Dois animais apresentaram reação positiva à proteína 16 (p16), e dois à gp 50, de pouca intensidade. Quanto à gp 70, proteína que, embora reagisse com o soro padrão positivo, não foi reconhecida por nenhum dos soros testados. Estes resultados sugerem que o WB pode ser empregado para o sorodiagnóstico rotineiro das lentiviroses, ensejando estudos mais amplos do padrão de reconhecimento dos antígenos apresentados por este novo sistema de purificação parcial de componentes virais.
[Western blot for the diagnosis of small ruminant lentivirus infections in goats: a simple method for antigen production].
Abstract: The serodiagnosis of small ruminant lentivirus (SRLV) infections in goats and sheep is usually performed by the agar-gel immunodiffusion technique (AGID) and by ELISA. Therefore, the western blot (WB) is the choice for the definition of antigen recognition patterns during the disease progression, being potentially useful for the diagnosis itself. In the present study, the antigen used for WB was obtained by a novel simple purification procedure: the dialysis of the supernatant of infected cultured cells, followed by centrifugation in sucrose gradient. Proteins in the pellet were separated by SDS-PAGE at 10% density and transferred to nitrocellulose membranes in a semi-dry blotting device. After development, five viral proteins were recognized by the standard positive serum sample, with molecular weights of 14-16, 25, 40, 50 and 70 kDa respectively. All 8 AGID positive goat serum samples recognized at least one band in the immunoblot, with different intensities. The total number of bands recognized by each serum sample varied considerably. A positive reaction to gp40 was observed with 4 sera, although rather weak in 3 cases. Two samples were reactive to p16 and two others to gp50, although weakly. Curiously, no serum was reactive to the 70 kDa antigen, recognized by the standard positive serum sample. These results suggest that the WB can be effectively used for the routine serodiagnosis of viral caprine arthritis encephalitis infection (CAEV). It can also support further studies on antigen recognition patterns with the new antigen provided by the novel simplified purification system of viral components described here. MenosResumo: O sorodiagnóstico das lentiviroses de caprinos e ovinos é realizado principalmente pela imunodifusão em gel de agar (AGID) e/ou ELISA. Embora relativamente simples, esses métodos não identificam os antígenos virais reconhecidos na resposta imune do animal examinado, por isso o western blot (WB) vem ganhando maior relevância como ferramenta de diagnóstico dessas enfermidades. Neste trabalho, o antígeno utilizado no WB foi obtido através de um sistema simplificado de purificação: concentração por diálise do sobrenadante de culturas celulares infectadas, seguido de centrifugação em gradiente contínuo de sacarose. A separação das proteínas virais foi obtida por SDS-PAGE a 10% e a transferência para membranas de nitrocelulose realizada pelo sistema semi-úmido. A revelação das membranas mostrou reconhecimento pelo soro padrão positivo de cinco proteínas, com pesos moleculares de 14-16, 25, 40, 50 e 70 kDa. Todas as 8 amostras de soro caprino, positivas na ADIG, reconheceram pelo menos uma banda proteíca no immunoblot, variando contudo o número de bandas reconhecidas. Reação positiva à glícoproteína 40 (gp 40) foi observada em quatro animais, com intensidade de reação discreta em três deles. Dois animais apresentaram reação positiva à proteína 16 (p16), e dois à gp 50, de pouca intensidade. Quanto à gp 70, proteína que, embora reagisse com o soro padrão positivo, não foi reconhecida por nenhum dos soros testados. Estes resultados sugerem que o WB pode ser empregado para o s... Mostrar Tudo |
Palavras-Chave: |
Artrite encefalite caprina; CAEV; Immunoblot; Lentivirose; SRLV; Western blot. |
Thesagro: |
Antígeno; Caprino; Diagnóstico; Doença animal; Ovino. |
Thesaurus Nal: |
Lentivirus. |
Categoria do assunto: |
-- |
Marc: |
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Embrapa Caprinos e Ovinos (CNPC) |
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3. | | KIDO, E. A.; PANDOLFI, V.; FERREIRA NETO, J. R. C.; BARBOSA, P. D. de A.; ANDRADE, P. P. de; LANE, R.; GUIMARÃES, F. C. M.; ABDELNOOR, R. V.; BENKO-ISEPPON, A. M. Differential transcriptional profiling of phakopsora pachyrhizi-infected soybean revealed by high-thoughput supersage. In: WORLD SOYBEAN RESEARCH CONFERENCE, 9., 2013, Durban. [Proceedings...]. Durban: OPDT: OPOT, 2013. Abst. 387. 1 CD-ROM. WSRC.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Soja. |
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4. | | ANDRADE, P. P. de; ARAGAO, F. J. L.; COLLI, W.; DELLAGOSTIN, O. A.; FINARDI-FILHO, F.; HIRATA, M. H.; LIRA-NETO, A. de C.; MELO, M. A. de; NEPOMUCENO, A. L.; NOBREGA, F. G. da; SOUSA, G. D. de; VALICENTE, F. H.; ZANETTINI, M. H. B. Use of transgenic Aedes aegypti in Brazil: risk perception and assessment. Bulletin of the World Health Organization, Geneva, v. 94, p. 766-771, Oct. 2016.Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
Biblioteca(s): Embrapa Milho e Sorgo; Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. |
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5. | | BENKO-ISEPPON, A. M.; KIDO, E. A.; PANDOLFI, V.; BARBOSA, P. K. A; BELARMINO, L. C.; MONTE, S. J. H. do; BRANDÃO, R. M. S. de; ARAUJO, A. de S.; CASTRO, J. A. F. de; SOARES-CAVALCANTI, N. da M.; SILVA, A. R. da; CALSA JUNIOR, T.; ROCHA, M. de M.; WINTER, P.; KAHL, G.; ROTTER, B.; HORRES, R.; MOLINA, C.; JUNGMANN, R.; AMORIM, L. L. B.; ONOFRE, A. V. C.; FERREIRA-NETO, J. R. C.; GRANJEIRO, T. B.; LIMA, A. S.; LOBO, M. D. P.; HOULLOU-KIDO, L. M.; CARVALHO, R. de; WANDERLEY-NOGUEIRA, A. C.; BARROS, P. dos S.; VIEIRA-MELLO, G. S.; BRASILEIRO-VIDAL, A. C.; BORTOLETI, K. C. de A.; PEDROSA-HARAND, A.; ANDRADE, P. P. de; ANDRADE, G. P. de; PIO-RIBEIRO, G.; SITTOLIN, I. M.; FREIRE FILHO, F. R. Brazilian cowpea transcriptome project: over 20 million expressed sequence tags to understand salinity and virus resistance. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE BIOTECNOLOGIA, 3., 2010. Fortaleza. Programa e resumos. Brasília, DF: SBBiotec, 2010. p. 97-98.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
Biblioteca(s): Embrapa Meio-Norte. |
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6. | | KIDO, E. A.; PANDOLFI, V.; BARBOSA, P. K. A.; SILVA, L. C. B. da; SILVA, A. B. da; MONTE, S. J. H. do; BRANDÃO, R. M. S. de S.; ARAUJO, A. de S.; CASTRO, J. A. F. de; SOARES-CAVALCANTI, N. da M.; CALSA-JUNIOR, T.; ROCHA, M. M.; WINTER, P.; KAHL, G.; ROTTER, B.; HORRES, R.; MOLINA, C.; JUNGMANN, R.; AMORIM, L. L. B.; ONOFRE, A. V. C.; FARIAS NETO, J. C.; GRANJEIRO, T. B.; LIMA, A. S.; LOBO, M. D. P.; HOULLOU-KIDO, L. M.; CARVALHO, R. de; WANDERLEY-NOGUEIRA, A. C.; BARROS, P. dos S.; VIEIRA-MELLO, G. S.; BRASILEIRO-VIDAL, A. C.; BORTOLETI, K. C. de A.; PEDROSA-HARAND, A.; ANDRADE, P. P. de; ANDRADE, G. P. de; PIO-RIBEIRO, G.; SITTOLIN, I. M.; FREIRE FILHO, F. R.; CASTRO, L. A. B. de; BENKO-ISEPPON, A. M. Brazilian cowpea transcriptome project: over five million expressed sequence tags to understand salinity and virus resistance. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE FISIOLOGIA VEGETAL, 12., 2009, Fortaleza. Desafios para a produção de alimentos e bioenergia: livro de resumos. Fortaleza: SBFV: UFC: Embrapa Agroindústria Tropical, 2009. p. 25-26. Resumo 61.Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
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